蛋白质在疏水色谱中的变性热力学 - 上海有机化学研究所.pdfVIP

化学学报 ACfA CHIMICA SINICA 1998 , 56 ， 807~811 蛋白质在疏水色谱中的变性热力学 李蓉吗李华儒* 陈国亮 边六交 (西北大学化工系 西安 710069) 摘要研究21 ~80t:温度范围内一些蛋白质和小分子在疏水相互作用色谱中的热行为.利用 Vant Hoff 作图(l时一 lIT)测定蛋白质分子的热力学参数(tili , t:S 和 AC) ，根据标准情变 (AS)和标准自由能变(AC)判断蛋白质在色谱过程中的构象变化，通过AH-AS的线性关系估 计蛋白质变性时的补偿温度(卢)，鉴定蛋白质在疏水相互作用色谱中保留机理的同一性. 关键词 疏水相互作用色谱，蛋白质，热力学参数，构象变化 近几年来，有关蛋白质色谱热行为的研究越来越受到重视.所谓热行为就是研究温度的变 化对溶质热力学性质、生物特性和保留行为的影响.自八十年代中期以来，色谱热力学的研究 大多集中在小分子的反相色谱上[13] ，而对于具有生物活性的蛋白质分子的色谱热力学研究 甚少. Karger 及其合作者[3] 利用疏水酷键合相考察了几种标准蛋白质在不同温度下的热行 为，通过 Z 值(l肘， -1gB 榕剂作图斜率)的变化研究了溶菌酶、α- 乳清蛋白和卢一球蛋白的 热稳定性.但未涉及蛋白质色谱过程中的热力学行为.本文在前面工作的基础上凶，试图从热 力学的观点研究蛋白质在疏水相互作用色谱中热变性时的构象变化. 1 实验 1.1 仪器和试剂 LC-6A 型高效液相色谱仪(日本岛津).细胞色素 C、肌红蛋白、榕菌酶、牛血清蛋白、α 一 1 淀粉酶和膜岛素(Sigma) ，使用前用流动相 B 液分别配制成浓度为 2mg. mL- 的标准蛋白榕 液.其它试剂均为分析纯，水为二次蒸馆水.聚乙二醇型疏水柱为本实验室合成，以高压匀浆法 100X4.6mm 柱. 装成 1. 2 实验方法 1 在不同柱温下进样50μL蛋白榕液，以1 mL.min- 流速进行线性梯度洗脱.梯度形式为: 0~25min， B 液。→100% 爪，B 变化速率为 4%/min. 其中流动相 A:2.5mo1.L一 1(NI-4 h白14 + 0.02mol.L一 1KH P0 ， pH=7.0; 流动相 B:O. 02mol. L -1KH P0 缓冲液， pH=7.0. 检 缓冲液 z 4 z 4 测波长 280nm，死时间用 0.1mol.L-1NaN乌测定. J 睛. 2 结果与讨论 擎男，57 岁，教授 收稿日期:1997-04-07，陕西省自然科学基金资助课题 808 化学学报 ACfA CHIMICA SINICA 1998 2.1 温度对蛋自质保留值的影晌 为了考察温度对蛋白质保留值的影响，在不同温度下利用梯