streptavidin beads 6ff 20150312 - 常州天地人和生物科技有限公司.pdfVIP

Streptavidin Beads 6FF 目录 1. 产品介绍………………………………………………………………….……..1 2. 纯化流程………………………………………………………………………...1 3. 填料清洗………………………………………………………………………...3 4. 订购信息及相关产品…………………………………………………………3 1.产品介绍 Streptavidin Beads 6FF 利用生物素与链霉亲和素配体之间的相互作用纯化生物素或生物 素化的蛋白、抗体等物质。链霉亲和素与生物之间的亲和力很强 ，需要在变性条件下洗脱， 链霉亲和素对亚氨基生物素的亲和力相对较弱 ，可以在pH9.5-11.0 结合，pH4.0 时洗脱， 不需要使用变性剂所以能更好的保持亲和素偶联物的活性。Streptavidin Beads 6FF 采用 高交联的6%琼脂糖介质 ，可耐受较高的流速及化学稳定性 ，适合大规模纯化。具体性能见 表1。 表1. Streptavidin Beads 6FF 品性能 性能 指标 基质 高度交联的6%琼脂糖微球 配体 链霉亲和素 载量 200nmol /ml 介质 粒径 (μm) 45-165 最大流速 0.3 MPa, 3 bar pH 稳定范围 2-10 储存缓冲液 含20% 乙醇的1XPBS 储存温度 2°C - 8°C 2.纯化流程 2.1 Buffer 的准备 所用水和 Buffer 在使用之前建议用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤。 生物素或生物素化物质的纯化 结合/洗杂 Buffer: 20mM NaH PO , 0.15M NaCl, pH7.4 2 4 洗脱 Buffer: 8M 盐酸胍 ，pH1.5 亚氨基生物素标签物质的纯化 结合/洗杂 Buffer: 50mM 碳酸铵,0.5M NaCl, pH10.0 洗脱 Buffer: 50mM 碳酸铵,0.5M NaCl, pH4.0 2.2 样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值 ，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、 腹水或细胞培养液稀释 ，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。 1 / 3 州天地人和生物科技有限公 司 样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤 ，减少杂质，提高蛋白纯化效率 和防止堵塞柱子。 2.3 Streptavidin Beads 6FF 装填 Streptavidin Beads 6FF 被广泛应用于工业纯化，因此，涉及到各种中压色谱层析柱的填 装 ，下面介绍使用Streptavidin Beads 6FF 填装层析柱的方法。 层析柱的装填 （使用储液器装填） 1. 用去离子水冲洗层析柱底筛 与接头 ，确保柱底筛 上无气泡 ，关闭柱底出口，并在柱 底部留出1-2cm 的去离子水。 2. 将树脂悬浮起来 ，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减 少气泡的产生。 3. 如果使用储液器 ，应立即在层析柱和储液器中加满水 ，将进样分配器放置于浆液表面 ， 连接至泵上 ，避免在分配器或进样管中产生气泡。 4. 打开层析柱底部出口，开起泵 ，使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层 析柱 ，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击 ，也可以避免柱床形 成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速 ，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得 到一个很好的装填效果。（注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75% ）当 柱床高度稳定后 ，在最后的装柱流速下至少再上3 倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。 5. 关闭泵 ，关闭层析柱出口。 6. 如果使用储液器 ，去除储液器 ，将分配器至于层析柱中。 7. 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器 ，