利用比色法测定其还原糖生成的量就可测定纤维素酶的活力.docVIP

准确测定和表征β-葡聚糖 1. β-葡聚糖酶的应用及作用机理 β-葡聚糖β-葡聚糖Choct M and Annison G., 1990)。在饲料β-葡聚糖限制麦类有效利用的主要因素β-葡聚糖酶有效分解麦类植物胚乳细胞壁中的β－葡聚糖，降低饲料中非淀粉多糖（Non-Starch Polysaccharide, NSP）及其抗营养因子的含量降低啤酒酿造麦汁黏度，提高麦芽溶出率，稳定啤酒质量。 图1 常见麦类作物中β-葡聚糖β-葡聚糖酶β-(1→3)、(1→)糖苷酶活性的专一性内切酶。图2示出β-葡聚糖的基本结构以及酶切作用的机理。其中，每个实心圆表示一个葡萄糖分子，实心圆之间连线表示糖苷键，箭头所示为酶切位点。从图中可以看到，葡萄糖分子之间通过β-(1→4)糖苷键cello-oligosaccharide)，同时结构单体之间通过β-(1→3)糖苷键连接从而形成β-葡聚糖β-葡聚糖酶作用于β-(1→3)、β (1→4)糖苷键，可使糖苷键断裂， 图2 β-葡聚糖2. 测定β-葡聚糖酶活性的标准方法 β－葡聚糖酶活的测定方法主要有3种即还原糖测定法、粘度测定法和底物染色法。其中还原糖测定法简便实用，比较准确，而且测定的结果重复性好，对于β－葡聚糖酶活的测定，认为是其3种方法中的首选方法；粘度测定法虽然更接近酶和底物在动物体内的作用方式，但这种方法目前仅能进行半定量描述，而且测定时比较繁琐费时；底物染色法是一种新型的方法，它是通过对底物的人工着色，然后测定颜色的变化来计算酶活，但这种方法难以操作，目前还没有得到广泛应用王在贵还原糖测定法DNS试剂发生显色反应。由于反应液颜色的强度与酶解产生的还原糖量成正比,而还原糖的生成量又与反应液中β－葡聚糖酶β－葡聚糖酶 3. β-葡聚糖底物的选择对β-葡聚糖酶活测定的影响 虽然各类作物中β－葡聚糖的含量不同，但分子结构都是相似的，即葡萄糖以β-(1→3)和β-(1→4)键相连的线性聚合物，不同点仅仅在于主要结构单体的纤维三糖和纤维四糖的比例不同，即β-(1→3)和β-(1→4)两种糖苷键的比例不同 (Susan M et al., 2004)。那么，选用不同作物来源的β-葡聚糖作底物对酶活测定有没有影响呢？ 从酶的作用机理来看，β-葡聚糖酶β－葡聚糖酶活单位定义：在pH5.0、40条件下，每分钟从β－葡聚糖底物溶液中降解释放1μmol还原糖（表示为还原糖当量）所需要的酶量为一个酶活单位，简称为U通过测定由酶分解底物产生小分子还原糖的量还原糖当量来计算样品酶活的。β-葡聚糖底物越纯、低聚合度小分子糖类含量越少β-葡聚糖王在贵4. 百特纯（Putus Macromolecular Sci Tech Ltd.）生产的β-葡聚糖的特点以及在酶活测定的应用。 有些科研单位和生产企业为了节省经费，采用自制的β－Glucan（大麦提取）作底物，虽然效果也还好，但不宜作为最终产品的验证试剂。β-葡聚糖β-葡聚糖平均售价在3500-4000元/g左右，无疑增加了β-葡聚糖酶β-葡聚糖β-葡聚糖β-葡聚糖Choct M., Annison G. Anti-nutritive activity of wheat pentosans in broiler diets [J]. British Poultry Science, 1990, 31:811-822. 2、Susan M., Yolanda B., Peter J., Wang Q., John W. Evaluation of Structure in the formation of gels by structurally diverse (1→3)(1→4)-β-D-glucans from four cereal and one lichen species[J]. Carbohydrate Polymers, 2004, 57:249-259 3、王在贵何瑞国张宏福饲用β－葡聚糖酶活力测定需注意的几个问题, ?饲料添加剂?, β一葡聚糖酶活力的测定, 分光光度法, Determination of β-glucanase activity in feed additives —Spetrothoetric method, 2005-01-04 发布, 2005-02-01 实施 1