硒缺乏对鸡肝脏内源性硫化氢及其相关生成酶影响.pdfVIP

目 录 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………………………I 英文摘要………………………………………………………………………………………．1II 1引言……………………………………………………………………………………………1 1．1硒缺乏对肝脏的影响……………………………………………………………………．．1 1．1．1缺硒与肝脏疾病………………………………………………………………………1 1．1．2缺硒时肝脏的病理学变化……………………………………………………………．1 1．2H2S的生物学功能…………………………………………………………………………2 1．2．1内源性H2s的生成途径………………………………………………………………2 1．2．2 H2S与疾病……………………………………………………………………………2 1．2．3 H2s的信号转导通路…………………………………………………………………．3 1．2．4 H2S含量的检测方法…………………………………………………………………．4 1．3目的与意义………………………………………………………………………………．5 2材料与方法……………………………………………………………………………………6 2．1试验鸡的饲养……………………………………………………………………………．．6 2．2试验的主要试剂及仪器…………………………………………………………………．．6 2．2．1主要仪器………………………………………………………………………………6 2．2．2主要试剂………………………………………………………………………………6 2．3肝组织中H2S含量的检测………………………………………………………………．．7 2．4．1引物的设计与合成……………………………………………………………………7 2．4．2总RNA的提取………………………………………………………………………一7 2．4．3 RNA反转录成cDNA…………………………………………………………………8 2．4．4荧光定量PCR扩增…………………………………………………………………．8 2．5鸡CSE基因的克隆、原核表达、多克隆抗体的制备……………………………………8 2．5．1鸡CSE基因序列的克隆与鉴定………………………………………………………8 2．5．2鸡CSE基因在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定……………………………………10 2．5．3抗鸡CSE多克隆抗体的制备………………………………………………………．．1l 2．6鸡CSE基因蛋白表达情况的检测………………………………………………………12 2．7试验数据的分析与统计…………………………………………………………………12 3结果与分析…………………………………………………………………………………．．13 3．1鸡csE多克隆抗体的制备……………………………………………………………．．13 3．1．1鸡CSE基因的PCR扩增结果………………………………………………………13 3．1．2鸡csE mRNA基因序列的测序结果………………………………………………．13 3．1．3重组表达载体的构建与鉴定………………………………………………………．．13 3．1．4融合蛋白的表达、鉴定与纯化………………………………………………………14 l 东北农业大学农学硕士论文 3．1．5多克隆抗体的制备和鉴定结果………………………………………………………15 3．2鸡肝脏H2s含量的检测结果……………………………………………………………15 3．3鸡肝脏CSE、CBS、3．MSTmRNA与CSE蛋白表达的检测结果 ………………………………………………………………………………………………………………………………16 4讨论…………………………………………………………………………………………………………………………19 4．1鸡CSE的克隆、表达及多克隆