分离和处理植物内生细菌的方法.docVIP

d植物内生菌分离处理方法 文献 材料 前处理 第一次消毒 第二次消毒（含三消） 处理 对照 培养基 刘明志，2011 南方红豆杉的老树皮、幼茎、叶 截成2～3 cm长的小段，去除树皮层 75%酒精中浸泡30 s 0．1%升汞溶液浸泡8 min，无菌水冲洗3～5次 研磨成匀浆液，倾倒于PDA上 切成0．5 cm左右的块，接种于有100 mg L－1青霉素和链霉素的PDA固体培养基表面。每皿10块 刘金花 2011 黄花蒿的根，茎，叶 叶切成1cm2,茎和叶切成1cm左右小段（两端皆有切口） 将根，茎，叶一次用75%酒精浸1min 1%的次氯酸钙溶液浸泡1min,用无菌水冲洗5次 置于含双抗的VA培养基平板培养 待切口处长出菌落后转至PDA培养基进行内生真菌的分离 宋培勇 2011 珙桐茎、叶和叶柄 将采集的新鲜珙桐的茎、叶和叶柄分 别用流水冲洗, 风干表面水分, 剪成小块或小段, 无菌水漂洗 2 次 75%酒精浸泡 1 min 再用 2% NaClO 溶液中浸泡 3 min, 转入 75%酒精中浸泡 30 s, 接着用无菌水漂洗 3 次, 取最后一次漂洗液涂布 NA 平板作为对照 平放于 NA 平板上, 28 °C培养 2?3 d 孙传伯2011 台湾7303毛豆全株 采回的样本用自来水洗净, 并用无菌纸吸干水分, 并用无菌纸吸干水分,切取支根110 cm长的小段, 须根切成 115 cm的小块 用 75% 酒精浸泡 5m in、7m in、10m in 分别用 0.1% 升汞溶液处理 4 m in、6 m in、8 m in进行表面灭菌,此试验分别重复 3次。最后用无菌水冲洗 4次,。最后用无菌水冲洗 4次 将组织块在研钵中充分研磨成匀浆 最后一次冲洗液涂 3种不同培养基平板, 26~ 28e 下培养2~ 3d, 筛选出最佳消毒时间和培养基, 将表面消毒彻底棉花根部切块放入灭菌研钵中用无菌水冲洗 4次,取上清液涂抹于培养基上。以无菌水冲洗为对照试验。 取上清匀浆涂抹于 3种不同培养基上, 取匀浆涂布于不同培养基平板, 每浓度重复 3次, 然后将培养皿置于26~ 28e 恒温箱中培养2~ 3d, 观察培养出的菌落形态 张鑫 2011 植物圣罗勒的健康 叶子 将叶子用流水冲洗 10 min 1% 的 次 氯 酸 钠 中 浸 泡 10 min 0． 02 mol / L、pH 7． 0 的无菌磷酸钾缓冲液( PB) 漂洗 4 次 加无菌水将材料研磨 涂布培养 李铭, 2011 石耳目地衣 为了诱导产孢，黑化菌株在光照/黑暗( 12 h∶ 12h) 条件下，于2%的 PDA 培养基上，18℃ 下培养 3 个月 刘杰凤 2011 健康的小白菜，染病的小白菜根，茎，叶 流水冲洗干净，剪成小段 75％酒精中浸泡3 min 10％次氯酸钠浸泡茎为8 min，根和叶由于气孔较茎大，浸泡5 min即可，然后用无菌水浸泡多次，每次3 min 无菌条件下用适量的 PBS 缓冲液捣碎 以最后一次的漂洗液作对照 ，30 ℃ 下培养 一个星期 搅拌后静置3 min，取上清液0．5 mL分别涂布于分离培养基平板上，每种材料做3次平行 朱士茂 2011 新采集的银杏枝条，叶子和根 在自来水中冲洗干净，然后将枝条和根截成 3 －4cm 长，将叶子和叶柄分开，分别将根，枝，叶放在不同的灭菌后的广口瓶中 ，根的表面灭菌: 0. 1%的土温 20 消毒 1min，无菌蒸馏水冲洗 2 次。 枝，叶和叶柄： 75% 的乙醇消毒 30s，无菌蒸馏冲洗 3 次 (一）,根：75%的乙醇消毒30s，无菌蒸馏水冲洗 2 次，0. 1% 升汞消毒 5min，无菌蒸馏水冲洗 5 次。 (二）枝，叶和叶柄：0. 1% 升汞消毒 7min，无菌蒸馏水冲洗 5 次 茎，将其表皮剥离，用无菌小刀纵切表皮取其中间的部分，然后将其切成 0. 5cm ×0. 5cm 大小 叶和叶柄，用研钵将叶磨碎 ( 内放石英砂和生理盐水) 然后用无菌移液管吸取0. 2ml 放入培养皿中 ①将以上接入的每种平皿按相同的方法接入 5min 后用无菌镊子取出;②用无菌蒸馏水冲洗已表面灭菌后的材料，然后将此液体移入培养基中，培养观察。 KB 培养基: PL 培养基: PDA 培养基: 肖淑贤 2011. 长势好、无病害的植株 在自来水中冲洗干净 采用升汞、乙醇、H2O2、次氯酸钠等表面消毒剂进行消毒，无菌水冲洗 直接切取植物组织或榨取植物组织汁液稀释 王剑峰 2011 取生长 15 天马铃薯 无表面灭菌方法 马铃薯内生菌单菌落的分离取生长 15 天马铃薯 LK99 组培苗,剪成长度约 1.0 cm 的带腋芽茎段接种于 PSA 培养基上,分别于光下(28℃、2200Lx、16hr 光/8hr 黑暗)或 2