乳酸菌扫描电镜制样方法及观察条件探究.pdfVIP

2012 2012年1月 内蒙古科技与经济 January Inner Science No．2TotalNo·252 第2期总第252期 MongoliaTechnologyEconomy 乳酸菌扫描电镜制样方法及观察条件探究 马 蓓1，刘 伟2，谢蓉蓉2，乌兰图雅2 (1．内蒙古农业大学生命科学学院；2．内蒙古自治区分析测试中心，内蒙古呼和浩特010000) 摘 要：本文以两种具有代表性的乳酸茵为材料，在进行扫描电镜样品制备和电镜观察过程中采用 了不同制样方法并变换了加速电压，分别进行了观察分析并附照片。通过对其观察结果比较研究得出其 中一组在15kV加速电压下茵体形态清晰完好。将乳酸茵制样方法和电镜观察条件选择结合在一起进 行比较研究尚未见报道。 关键词：乳酸茵；扫描电镜；样品制备；观察条件 中图分类号：TNl6文献标识码：A 文章编号：1007—6921(2012)02一0116一04 乳酸菌作为一种生命活动中不可缺少的益生菌 1．1．1实验材料及用品。固体培养基上培养好的乳 广泛存在于自然界．与人类生活关系密切。因其具有 酸杆菌和乳酸球菌菌体各一份、离心管6支、与离心 促进动物生长，调节胃肠道正常菌群、维持微生物平 管管口配套的胶塞6个、接种环2个、干燥用样品框2 衡，改善胃肠道功能、提高食物消化率和生物效价、 个、5cm样品台一个、盖玻片4片、滴管4支。 降低血清胆固醇，控制内毒素、抑制肠道内腐败菌生 1．1．2实验仪器。普通医用离心机、临界点干燥器、 长、提高机体免疫力等特殊功效，被越来越多的相关 1B一5型离子溅射仪、S一530型扫描电子显微镜。 学者所关注。近些年来，随着生物科学工作者对乳酸 1．1．3实验试剂及配制。磷酸盐缓冲液(pH7．2)、 菌品种研究鉴定、新品种发现、生理功能等诸多方面 戊二醛、无水乙醇、乙酸异戊脂、液体二氧化碳。 的研究及乳酸菌在食品科学、医药卫生等领域应用 研究的深入，对乳酸菌形态学研究成为乳酸菌研究 7H20：53．65 g；加蒸 中重要且不可缺少的部分。真实准确的表达其形貌 g；NazHP04·12HzO：71．64 特征对乳酸菌研究有着重要意义。 馏水溶解至1 多年来，随着科学技术的日新月异，显微成像技 术发展迅猛，与光学显微镜、透射电子显微镜及激光 解至1 共聚焦显微镜相比，扫描电镜具有能够直接观察样 稀释到100mL，则配的0．1M的缓冲液。 品表面的结构，可用于观察样品的尺寸及观察范围 固定液的配制：戊二醛多为25％水溶液，可按表 较大、样品制备过程相对简单，不用切片、样品可以 1配制所需浓度的戊二醛固定液。 在样品室中做平移、旋转和倾斜，从而实现对样品不 表1 戊二醛固定液配制 同部位进行观察和分析，它的景深较光学显微镜大 戊二醛最终浓度(％) 1．0 1．5 2．0 2．5 3．0 4．0 几百倍、比透射电镜大几十倍，因而图像有丰富的立 50 50 50 50 50 0．2M磷酸缓冲液(mL)50 体感，分辨率介于光学显微镜与透射电镜之间，观察 6 8 10 12 16 25