MicroRNA-129促进骨髓间充质干细胞向心肌分化的实验研究.pdfVIP

·570· 中国胸心血管外科临床杂志2013年10fl第20卷第5期 ChinJClinThoracCardiovascSurg，October2013，Vo1．20，No．5 论著 ·基础研究 MicroRNA．129促进骨髓间充质干细胞 向心肌分化的实验研究 路结鑫 连锋 薛松 朱洪生 (上海交通大学医学院附属仁济医院 心血管外科， 海 200147) 摘 要： 目的 研 究microRNA．129(mir．129)对 骨髓 间充质 干细 胞 (bonemarrowmesenchymalstemcells， BM．MSCs)向心肌分化过程中的促进作用及其机制。 方法 分离培养 SD大鼠骨髓问充质干细胞，通过慢病毒转 染使细胞获得过表达基因分为4组：对照组 (MSCs)；慢病毒空转组 (Lentiviralvectors+MSCs，Lv—MSCs)；mir一129 单转染组 (mir一129一MSCs)；mir一129 瞎原合成酶激酶 (GSK一3)双转染组 (mir。129+GSK一3p—MSCs)。以10gmol／L 浓度的5一氮杂胞苷 (5-Aza)诱导MSCs向心肌细胞分化后 ，分别以第 1d、5d、10d、15d和20d为时间点 ，采用real— time—PCR检测 GATA．4、NKx2．5、MEF一2C的mRNA水平，以第 10d、15d、20d为时间点，用蛋白质印迹法 (Western blotting)检测肌钙蛋白I(cTnI)、结蛋白(Desmin)、GSK一3p以及磷酸化 3-catenin与非磷酸化31-catenin的表达量。 结果 与对照组比较 ，随着研究时间点的推移 ，mir一129单转染组反映心肌分化的相关标记物基夭[I和蛋白水平明显升 高，GSK一3B的表达水平则显著降低，非磷酸化 31-catenin／磷酸化 31-catenin比值升高；当MSCs同时过表达mir-129 和GSK一3B时，相关的心肌标记物基因和蛋白均低于mir一129单转染组 ，非磷酸化 13-catenin／磷酸化31-catenin比值明 显降低。 结论 过表达mir．129能够促进MSCs向心肌细胞分化，可能的机制是通过抑制GSK一3p的生成，从而削 弱了对~-catenin的磷酸化抑制，后者游离入核开启调控干细胞下游的心肌分化途径。 关键词： 骨髓问充质干细胞； 心肌分化；microRNA一129； 糖原合成酶激酶 中图分类号：Q813文献标识码：A 文章编号：1007—4848(2013)05—0570—07DOI：10．7507／1007—4848 M icroRNA一129PromotesCardiomyogenesisinBoneM arrow M esenchymalStem Cells LU Zhe—xin，LIAN Feng， XUESong，ZHUHong—sheng．(DepartmentofCardiovascularSurgery，RPnjiHospita1．MedicalSchoolofShanghai JiaotongUniversity，Shanghai200147，P．R．China) Correspondingauthor：LIANFeng，Email：dr．1ianfeng@hotmail．corn Abstract： Objeetive ToexploretheinductionofcardiomyogenesisofmicroRNA一129(mir一129)inratbonemarrow mesenchymalstemcells(BM—MSCs)anditsmechanism．Methods BM—MSCswereisolatedfromSprague—Dawleyrats andculturedinvitro．Overexpressionofmir一129orbothmir一129andglycogensynthasekinase一3p(GSK一3p)inBM—MSCs wasproduce