榄香烯对荷H22小鼠的抑瘤作用及对Bcl-2家族促细胞凋亡蛋白N表达的影响.pdfVIP

大连医科大学 硕士学位论文 榄香烯对荷H22小鼠的抑瘤作用和对Bcl-2家族促细胞凋亡蛋白 N表达的影响 姓名：许文翠 申请学位级别：硕士 专业：中西医结合临床 指导教师：张红 201106 榄香烯对荷H22小鼠的抑瘤作用和对Bcl．2 家族促细胞凋亡蛋白N表达的影响 硕士生姓名： 许文翠 指导教师： 张红教授 指导小组： 张红教授左云飞教授 专业名称： 中西医结合临床 摘 要 目的：肝癌是临床上常见的恶性肿瘤，有“癌中之王”之称，目前肝癌的治疗 仍以手术及化疗为主，对于术后化疗或失去手术机会而接受化疗的患者来说，具 有肝肾毒性等不良反应的化疗药物其远期疗效并不理想，为提高患者生存质量， 延长生存期，更需要有效且低毒的药物。近些年来中药的抗癌作用逐渐为人们所 认识，榄香烯是我国自主研发的二类非细胞毒性的广谱抗肿瘤药物，目前被广泛 应用于多种肿瘤的治疗，其抑瘤作用机制也被不断的深入探讨，本实验将榄香烯 观察其抑瘤作用并探讨可能的机制，以期为中药抗肿瘤的临床治疗提供更多依据。 方法：选用∞8周，体重18～229的Balb／C小鼠35只，以剪耳方法作标记并 随机等分为5组，每只小鼠左前腋窝下皮下注射浓度为4x107个／ml的H22肝癌细 胞悬液0．1ml造实体瘤模型，以出现皮丘为接种成功，接种24小时后，5组小鼠 天1次进行治疗，治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态，作为 评测药物毒性的指标，测量移植瘤大小并以体积计算抑制率，治疗10天后以颈椎 脱臼法处死小鼠，无菌条件下剥取移植瘤，拍照，10％福尔马林溶液固定，制作瘤 组织的石蜡切片，HE染色法观察各切片中瘤组织的差异，以盐水组为对照组，采 用免疫组化法检测榄香烯高剂量组对Bcl．2家族促细胞凋亡蛋白N表达的影响。 结果： 1．荷瘤小鼠经治疗第3天，5-FU组及联合组小鼠瘤体积较对照组减小即有统 计学意义，治疗5天后，各用药组瘤体积较对照组均有减小，差异有统计学意义 (P0．05)，联合组优于单独用药组；治疗lO天后，各组剥离的移植瘤大小可直接 观察到，以对照组平均瘤体积及用药组平均瘤体积的差异计算抑制率，榄香烯组 低剂量组及高剂量组对瘤体积的抑制率分别为10．2％和26．7％，5-FU组为52．2％， 而联合用药组则达到61．O％。 2．对小鼠体重影响，无论是与对照组比较还是与小鼠治疗前比较，联合组及 5-FU组小鼠体重均明显下降，榄香烯各组小鼠体重较对照组亦有下降，而因癯体 积不断增大，与治疗前相比体重增加。与对照组相比，计算各组小鼠体重下降率， 榄香烯组为0．6％巧．2％，5-FU组及联合组分别为12．6％和13．0％；与治疗前相比， 5-FU组及联合组小鼠体重下降率分别为13．1％和21．0％。 3．以小鼠饮食、活动及毛发色泽观察对象来评价小鼠生存质量，可发现随着 治疗时间的延长，榄香烯组的小鼠生存质量和生存状态均高于5-FU及联合组。 4．显微镜下观察各组瘤组织的HE切片，相对于对照组的细胞核深染、排列 紧致，可见各用药组对瘤组织不同程度的破坏，尤其是榄香烯高剂量组，可见核 淡染、细胞肿胀、固缩或者散落成碎片。 5．Bel．2家族促细胞凋亡蛋白N阳性反应为棕黄色颗粒，定位于胞浆，显微 镜下随机选取10个高倍视野，计数约500个细胞，榄香烯高剂量组阳性细胞数比 例为17．2％，与对照组比较其表达具有统计学意义(PO．05)。 结论： 1．榄香烯和5-FU均能有效地抑制H22肿瘤的生长。 2．榄香烯可作为化疗药5-FU的辅助药物达到治疗肝癌的目的。 3．榄香烯能够诱导Bcl．2家族促细胞凋亡蛋白N的表达，这可能是其抑制肝 癌的新途径。 关键词： 榄香烯H22抑瘤作用促细