放射性自显影技术分解.ppt

显微放射性自显影与核酸分子杂交及细胞学技术相结合，发展了原位分子杂交技术。即将完整的细胞核染色体，做成细胞学片子，使其中的DNA固定在载玻片上，并保持它们原来的细胞学位置，进行解链处理后，与用同位素标记的和它互补的RNA或单链的DNA溶液杂交，然后进行自显影，可以从中观察到杂交分子在染色上所占的位置。 为了研究不同营养元素在植物中的循环形式， Biddulph等向红菜豆水培液中施入32P、35S和45Ca，吸收1小时后转入非标记的营养液中。然后按一定时间间隔进行自显影。证明在整个96小时的实验期间，有一部分磷仍在继续运转，硫在开始时是活动的，但当它进入幼叶后，活动性就停止了。钙却不同，当它被蒸腾流带入叶子后，就保持在叶中，全不流动。 从植物对寄生物的影响来看，植物中的放射性物质可以进入寄居其上的病菌或害虫。但病菌通过什么组织？在什么时候开始吸收寄主中的养料？ 用3H-标记的碱基和14C-乳清酸标记寄主后，用非标记的锈病夏孢子接种，证明在吸器形成后才开始吸收，这时寄主中的标记物，通过吸器鞘进入吸器和菌丝体。 浙江农科院和上海原子核研究所对除草丹的研究证明，稗草吸收14C-除草丹的能力比水稻高1-2倍，它主要积累于稗草的叶鞘和茎基中，抑制了叶鞘的生长，造成基部肿疽，最后缺抑制生长，饥饿而死。 除草丹抑制了稗草根系对养分的吸收能力和向地上部器官的运转。施药和不施药的相比，其根系吸收32P量相差50%，往地上部运输的32P量相差一倍多，但对水稻的影响较小。 课后作业 假设对32P标记的某植物叶片进行放射自显影测定，需要的曝光量为 107个粒子/ cm2。经放射性仪器测定叶片的放射性活度为500CPM，而已知此仪器测量效率为10%，问该植物叶片需要进行多长时间的曝光，才能获得满意的效果。 本章总结 一、讲述的内容： 放射自显影技术，包括：原理、一般操作程序、宏观和光学自显影的制作方法及影响自显影质量的几个因素及其在科学研究中的应用。 其中 重点：一般操作程序； 难点：曝光时间的选择 二、课后复习的要求 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 第四章 放射性自显影技术 第一节 原理和一般制作程序 第二节 放射自显影的制作方法 第三节 与自显影质量有关的几个因素 第四节 放射性自显影技术的应用 第一节 原理和一般制作程序 一、放射性自显影的原理和特点 放射性自显影 利用照相乳胶记录、检查和测量样品中放射性核素的分布、定位和定量的方法。 放射性自显影的特点 （1）准确定位； （2）灵敏度高； （3）能保持机体的完整结构； （4）可以长期保存； （5）操作简便，不需要复杂的仪器和设备。 局限性： 定量误差大，只作相对定量；测定的速度较慢。 （一）自显影标本的制备 （二）曝光 （三）显影 （四）定影 （五）水洗及干燥 二、放射性自显影的一般制作程序 1. 洗净； 2. 吸水纸吸干； 3. 平铺于标本夹； 4. 干燥。 （一）自显影标本的制备 曝光 : 把照相乳胶曝露于射线而产生潜影。 1.感光材料的选择: 由溴化银和明胶组成。 明胶是溴化银的支持剂，又是溴原子的吸收剂；它决定着乳胶的通透性、吸水膨胀、浓度稀释和坚膜作用等特性。 而乳胶的敏感度决定于溴化银的浓度、颗粒大小及其配制方法。 （二）曝光 乳胶名称 卤化银晶体直径（μm） 卤化 银 (%) 晶体 粒子数 /1000 μm3 灵敏度 分辨力 产品特点 适用范围 幻灯片 电影胶片 ~1 10~15 6 差 中 乳胶层约15μm涂于片基的一面 宏观或光学显微自显影 X射线乳胶片 0.2~3 10~20 6 高 差 乳胶层约30μm涂于片基的两面 宏观自显影 核乳胶 0.02~0.5 45 10000 高 高 液体、 干板、 脱基膜 光学显微及电镜自显影 几种自显影感光材料的性能 （1）在有效期内使用。 （2）周围不能有放射性物质。 （3）X射线乳胶片和幻灯片应注意避光、防潮、防热，最好在恒温