复旦大学分析化学AII第十章液相色谱程序.ppt

* 示差折光检测器 * c. 荧光检测器（fluorescence detector） 高灵敏度(10-12g/ml)、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； * (3). 高压输液泵 主要部件之一，压力：20-80大气压。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 * 气相色谱分离条件：1.柱温；2.气体压力、流速 程 序 升 温 * (4). 梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 * (5). 进样装置 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示： * (6). 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 * 五. 分离类型选择 Choice of separation types 反相HPLC 吸附色谱或正相HPLC 阴离子交换、离子对 阳离子交换、离子对 凝胶过滤色谱（水为流动相） 凝胶渗透色谱（有机五作流动相） 相对分子量2000 相对分子量2000 非离子 离子 水溶性 脂溶性 低极性 中高极性 阴离子 阳离子 样品 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * 第21章 液相色谱分析法 * 一. HPLC与GC的区别 流动相分别为液体和气体：扩散系数 Dm液/Dm气=10-5 速率方程H=A+B/v+Cv A（涡流扩散项）∝dp B（分子扩散项）忽略不计 C（传质阻力项）∝dp2 v∝1/dp * 填充柱气相色谱柱，填料尺为80-100目(2毫米); 高效液相色谱的固定相粒度在2－10微米,因此需要很高的反压。 高效液相色谱（HPLC）又称为： 高速液相 HSLC 高压液相 HPLC 高分辨液相 HRLC * HPLC GC 分析对象 70%-80%化合物 20-30%气体和无机、有机 流动相 液体（与组分有作用） 气体（化学惰性） 柱温 低温、室温 高温 流动相产生 高压泵+贮液瓶 高压钢瓶 进样 进样器 直接进样 柱形 直型 螺旋型 载体粒子 2－10um 2mm 柱 长 10 cm-25 cm ＞1 m 高压液相色谱与气相色谱的比较 * * 二.高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 * 三. 液相色谱类型 固定相：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等。 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 吸附色谱对中等分子量的油溶性样品可获得最佳的分离，适用于异构体分离和同系物分离；而对强极性或离子型的样品，有时会发生不可逆吸附，不能得到满意的结果。 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； 1. 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography * 1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ - - - - - - - - ＜羧酸，醇 2. 吸附剂的活性： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂（固体固定相） 弱极性物质——选择强吸附剂（固体固定相） 3. 流动相的选择： “相似相溶”原则 基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。 吸附剂和流动相的选