Y187 酵母感受态细胞 - 天恩泽.PDF

隆 必 克 CAT#: 140389- 10 干冰运输、-80℃保存 列 系 Y187 酵母感受态细胞 Y187 Competent Cell 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 Y187 菌株是Clontech 公司开发的GAL4 系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型， 可直接转化质粒或与MATa 型酵母菌株（Y2HGold ，AH109 等）通过mating 操作进行 筛库试验。Transformation marker 为: trp1, leu2，报告基因为：lacZ, MEL1 。Y187 -GAL4 酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7 和PGADT7。质粒PGBKT7 的筛 选标志为TRP1 ，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N 端 1~ 174 位氨基酸)与目 标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒PGADT7 的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端 768 ~881 位氨基酸)与目标蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4 系统原理：一个完整的酵母 转录因子 GAL4 可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N 端 1~174 位氨基酸区段的 DNA 结合域（DNA-BD）和位于C 端768~881 位氨基酸区段的转录激活域(AD)。DNA-BD 能够识别 GAL4-responsive gene 的上游激活序列UAS ，并与之结合。而AD 可以启动 UAS 下游的基因进行转录。BD 和AD 单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现 完整的GAL4 活性，使含有UAS 的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD 不与AD 结合，将要检测的蛋白质分别与BD 和AD 融合，形成 bait 融合蛋白（bait -BD）和 prey 融合蛋白（prey-AD ），如果 bait 和 prey 发生相互作用，就会促使 BD 和 AD 的相互 接近，形成完整的GAL4 ，从而激活报告基因的转录。Y187 有两个报告基因：lacZ, MEL1 ， 分别由两种不同的启动子（G1 ，M1）启动，这两种启动子只有GAL4 识别的 17bp 核心 区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。 Y187感受态细胞是实验室常用酵母双杂用菌株，本产品经特殊工艺制作而成，经 PGADT7质粒检测转化效率为104 cfu/μg DNA。 菌株基因型如下： MAT α, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3, 112, gal 4 Δ, met– , gal80 Δ, URA3 : : GAL 1 -GAL 1 -lacZ, MEL 1 UAS TATA 规格及成分 成分 编号 包装 Y 187 感受态细胞 140389A 0.1 mL ×10 PGADT7 （control vector），10 ng/μL 140389B 10