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小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型 缺血再灌注损伤(IRI)是器官移植、休克、动脉搭桥术后等普遍存在的问题。肾脏是发生IRI 极为 常见的器官之一，尤其肾移植，不可避免的要经历一定程度的IRI, 肾脏缺血再灌损伤是急性肾衰的常 见原因。对麻醉动物的肾动脉进行阻断和再通后，可引起肾脏缺血再灌注损伤。在缺血再灌注过程中， 钙超载、线粒体能量合成障碍、氧自由基的增多等因素导致肾小管内皮细胞脱落，肾脏组织结构的破 坏进而使肾脏功能发生障碍。 1.实验动物 SPF 级Balb/C 小鼠，雄性，周龄为4w~6w ，体重为20g~22g 。 2.实验分组： 实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组，每组15 只动物。 3.模型周期 24h 、72h 4.建模方法 1. 选取20-22g 左右小鼠，术前禁食12h，自由饮水。 2. 3 ％戊巴比妥钠(80mg ／kg)腹腔注射麻醉,小鼠背部去毛，消毒备皮。 3. 在背部脊椎旁0.5cm、肋骨下缘0.5cm 处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏, 小心分离出两侧肾脏的 肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。 4. 缺血45min 后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。 5. 分两层缝合开口,待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡 情况并做好记录。 6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。 7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h 六个时间点取材。麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置 2h 后于4℃3000r 离心10 分钟提取血清，放入-80 冰箱冻存。同时取左肾组织留作病理标本，右肾组 织分生标本。 5.模型的评价 1 血清生化指标检测： 取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN （尿素氮）和Scr （血肌酐） 水平,评估肾功能。 2 肾系数检测 摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。 肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g） 3 病理组织学检测： 4 ％多聚甲醛溶液固定48h。常规组织脱水、透明、浸蜡 、包埋。石蜡切片进行HE 染色和PAS 染色。 对照组小鼠肾小球、 肾小管及肾间质结构基本正常。在 模型组组， 随着再灌注时间的延长呈现不 同程度的肾脏病理改变， 可见肾小管上皮细胞浑浊肿胀，出现水样或空泡变性，刷状缘消失，部分 肾小管上皮细胞凝固性坏死、脱落，腔内可见管型，并可见间质水肿，间质内灶性炎症细胞浸润，肾 小球病变不明显。每张切片×200 倍镜下取外髓质部 10 个视野，按 0 = 正常， 1 = 轻微损伤(受损肾小管 5%) ， 2= 轻度损伤(受损肾小管 5 %～25 %) ， 3 = 中度损伤(受损肾小管 25 %～75 %)， 4 = 重度损伤(受损肾小管 75 %) 作半定量分析并计算其均值，作为肾小管坏死的评分指数 4 细胞因子的检测 ELISA 法检测血清 TNF- α、IL-6 含量, 模型组小鼠血清 TNF- α和 IL- 6 含量在各时间点均显著 高于对照组，其中24h 为最显著。 6.注意事项 6.1 分离肾脏时不要损伤肾脏及其他器官 6.2 缺血要一次成功否则会造成缺血预处理而减轻损伤 6.3 缺血和应可见肾脏先变白一段时间后变暗发紫 Artery clamp Artery clamp 图1 小鼠肾脏缺血再灌注手术操作图（动脉夹夹闭两侧肾动脉，缺血45min 后松开动脉夹） 武汉云克隆诊断试剂研究所