核糖核酸酶活力检测标准征求意见稿（2016-11-20）-中国标准化研究院.DOC

前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：。 本标准主要起草人：。 核糖核酸酶活力测定 1 范围 本标准规定了核糖核酸酶活力测定原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析。 本标准适用于生化试剂核糖核酸酶活力测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 定义 3.1 核糖核酸酶（ibonuclease，RNase） 水解核糖核酸（RNA）中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸核酸的核酸酶。根据酶作用的位置不同，可进一步分为内切核糖核酸酶与外切核糖核酸酶。 3.2 核糖核酸酶单位（ibonuclease activity unit） 4 原理 核糖核糖核酸酶 5 仪器设备及器具 吸光度精确至0.001。精确至0.01。比色皿5.5 电子天平：0.0001 g和0.01 g。 6 试剂 GB/T 6882规定的二级水。 6.1 0.1 mol/L 乙酸/乙酸钠（NaAc/HAc）缓冲液，pH 5.0 称取8.2 g NaAc溶于水中，缓慢加入HAc调pH至5.0，混匀后定容至1000 ml。 6. 酵母核糖核酸 来源于圆酵母（Torula Yeast），含量≥98%。 7 分析步骤 应在的中进行。 7. 试验液的制备 7..1 酵母RNA溶液 称取酵母RNA mg溶于水中，使其溶液浓度为0.15 mg/mL。 7..2 固体样品待测酶液制备 称取 mg样品溶于中，调节核糖核酸酶液浓度为0.7 mg/mL。 7..3 液体样品待测酶液制备 将液体待测酶样用调节最后的溶液中核糖核酸酶液浓度为0. mg/mL。 7. 酶促反应 7.4 分光光度分析 空白对照管标记为0号管，检测管分别标记为1-3号管，加样方法如表1所示，反应后在260 nm处测对照管和检测管溶液的吸光度。 表1 待测样液加样方法 0号管 1号管 2号管 3号管 酵母核糖核酸溶液（mL） 1.5 1.5 1.5 1.5 水（mL） 0.5 0.0 0.0 0.0 NaAc/HAc缓冲液（mL） 1.0 1.0 1.0 1.0 待测酶液（mL） 0.0 0.5 0.5 0.5 8 结果分析 8.1 酶活计算 按照式（1）计算： （1） 式中：U/mL或U/g）； △A260：检测管在260 nm的吸收值 1000：吸光度原值与活力规定中规定吸光度0.001的换算系数。 15：反应时间与活力单位定义中的换算系数。 以平行样的平均值为最终的酶活力测定值，计算结果保留整数位。 8.2 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 __________________________ 1 GB/T ××××—201× I GB/T ××××—201× 2 GB/T XXXXX—201X 中华人民共和国国家标准 ICS 07.080 B 20/39 核糖核酸酶活力测定 Determination of the activity of ribonuclease （征求意见稿） 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 201X-XX-XX 发布 201X-XX-XX实施 GB/T XXXXX—2012 II GB/T XXXXX – 2012 3