久效磷人工抗原的制备、鉴定与免疫效价的测定.pdfVIP

田 2008，Vo1．25 No．6亿亏与硅物互程Ch emistry Bioengineering 久效磷人工抗原的制备、鉴定与免疫效价的测定 夏 莹，李中振，杨 迪，杨 旭，丁书茂，袁均林 (华中师范大学生命科学学院环境科学实验室，湖北武汉430079) 摘 要：以戊二醛为交联弃I制备了久效磷(Mcp)人工抗原(Mcp()VA)和包被抗原(Mcp—BSA)，采用紫外吸收光谱 和SDs_PAGE对人工抗原进行了鉴定。取人工抗原免疫BA1 B／c小鼠，并采用ELISA法对小鼠抗血清效价进行了检 测。结果表明，人工抗原中M c，P与OVA的偶联比为23．3：l，Mcp一()VA的最适包被浓度为1_5 g·mI _。，3次免疫后 小鼠的抗血清效价均达到 1：2 ㈩ 以上。 关键词：久效磷；人工抗原：抗血清 中图分类号：TQ 450．2 Q 503 文献标识码：A 文章编号：1672—5425(2008)06—0038—03 随着社会经济的发展及人们生活水平的提高，食 HRP标记羊抗鼠IgG，Jackson，中山公司分装；BSA， 品安全问题已引起全社会的广泛关注，其中农药残留 Roche分装；卵清蛋白(oVA)、福氏完全佐剂和福氏 的检测 尤为重要 。久 效磷 (Monocrotophos， 不完全佐剂，Sigma公司；戊二醛溶液(50 )。 Mcp)，化学名为 0，()L二甲基O一(1一甲基一2一甲基氨基 包被缓冲溶液(0．85 mol·一L～、pH值 9．6的碳 甲酰基)乙烯基磷酸酯，商品名为 Azodrin或 Nuva— 酸缓冲溶液)：Na2 CO。1．59 g、NaHC()。2．93 g，加蒸 cron，是一种高效内吸性、兼有强烈触杀和胃毒作用的 馏水至1000 mI 。 有机磷杀虫剂，大白鼠经皮LD 。为41．98 mg·kg～， 封闭液：1 明胶(用包被缓冲溶液配制)。 急性经El LD 。为 11．2 mg·kg一 。由于其杀虫谱 洗涤缓 冲溶液 (PBST)：含 0．05 (体积 比) 广、药效高，使用量逐年增加。酶联免疫吸附分析技术 Tween一20的0．01 mol·L PH值7．4的PBS。 (ELISA)将化学合成、生物技术与理化测试手段有机 抗体稀释溶液：含0．05 (体积比)Tween一20、0．1 结合起来，具有特异性强、灵敏度高(检测限可达 10。 (体积比)明胶的0．01 mol·L pH值7．4的PBS。 ～ 10 。级)、方便快捷、分析容量大、分析费用低、仪器 UP200S型超声波粉碎机，Hielscher；S一3100型 化程度要求不高等特点，在对复杂样品中超微量农药 UV—Visible分光光度计，Scinco；AVATAR 360型 残留分析和现场快速检测方面，具有， 阔的应用前景 FTIR红外光谱仪，Nicolet；真空干燥机，Labconco； 和开发潜力 ]。近年来 EI ISA检测技术在农药残留 5410型CO2恒温培养箱，Napco； Quant连续波长酶 分析方面的研究日益增多，但关于久效磷的EI ISA检 标仪，Bio—teck；自动凝胶成像仪，EEC。 测方法国内外还未见报道。 1．2 方法 作者在此以戊二醛为交联剂制备了久效磷人工抗 1．2．1 久效磷人工抗原和包被抗原的制备 原(Mcp—oVA)和包被抗原(Mcp—BSA)，取人工抗原 以久效磷为原料，采用戊二醛法将久效磷与载体 免疫小鼠，并用间接ELISA法检测了抗血清效价。 卵清蛋