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遗传学实验实验报告果蝇的三点测交杂交实验姓名：刘乐乐班级：生计11.3 学号：201100140084 时间：11月18日实验目的：1、学习果蝇三点杂交实验的原理和方法。2、通过三点测交，验证基因的连锁与交换规律，确定基因在染色体上的位置。3、掌握果蝇的杂交技术，并学会记录交配结果和数据统计处理的方法。二、实验原理1、基因的连锁与交换位于同一条染色体上的基因是连锁的，而同源染色体上的基因之间会发生一定频率的交换，使子代中出现一定数量的重组型。重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。而根据基因在染色体上直线排列的原理，基因交换频率的高低与基因间的距离有一定的对应关系。基因图距就是通过基因间重组值的测定而得到的。如果基因座位相距很近，重组率与交换率的值相等，直接将重组值作为基因图距；如果基因间相距较远，两个基因间往往发生两次以上的交换，必须进行校正，来求出基因图距。2、三点测交用野生型纯合体与三隐性个体杂交，获得三因子杂种（F1），再使F1与三隐性基因纯合体测交，通过对测交后（Ft）代表现型及其数目的分析，分别计算三个连锁基因之间的交换值，从而确定这三个基因在同一染色体上的顺序和距离。通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置，即相当于进行三次两点测验，而且能在试验中检测到所发生的双交换。如果两个基因间的单交换并不影响邻近两个基因的单交换，那么预期的双交换频率应当等于两个单交换频率的乘积，但实际上观察到的双交换值往往低于预期值，因为每一次发生单交换，它邻近也发生一次交换的机会就减少，这叫干涉。一般用并发率表示干涉的大小。3、实验材料♀6（wmsn白眼小翅卷刚毛）× 18♂三、实验材料、仪器和用品1、黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）18和6品系；2、解剖镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿；3、乙醚等。四、实验步骤第一周：1、选择2只6号雌果蝇和2只18号雄果蝇放入新的培养管中，并贴上标签，写上杂交组合、实验时间、实验者的姓名等内容。2、将培养瓶置于25C下培养一周。第二周：3、将培养瓶中所有亲本蝇清除，继续培养一周。第三周：4、观察并记录正反交组合中F1的性状。5、从正反交组合中的F1中各挑选出两对果蝇，放入一个新的培养瓶，贴上标签，在25C下继续培养。第四周：6、将培养瓶中所有亲本蝇清除后，继续培养一周。第五周7、当F2代果蝇数全数麻醉至死，倾倒在白色硬纸板上，用解剖镜观察果蝇的不同性状，分别统计并记录数据。五、实验数据及分析测交F3性状F1基因实得数比例重组发生在w-snsn-m w-m白小卷+ + +15568.1%红长直wsn m408白小直+ + m152.8%√√红长卷wsn +8白长直+ sn m7110.0%√√红小卷w + +12红小直w + m7819.1%√√白长卷+ sn +80合计827100%29.1%21.9%12.8%基因在染色体上的顺序是w、m、sn，重组率见上表，双交换率为2.8%；w与m距离是12.8，m与sn距离是21.9，校正w与sn距离为29.1+2x2.8=34.7。并发率=0.028/(0.1*0.191)=1.47。图1实验结果遗传图图2理论遗传图六、思考与讨论1、亲本必须为处女蝇，其原因是雌蝇生殖器官有受精囊，可以保存交配所得的大量精子，能使交配后卵巢产生的卵受精。在杂交时，若雌蝇不是处女蝇，其体内已储有另一类型雄蝇的精子，会严重影响实验结果，导致整个实验失败。故处女蝇的挑选十分关键；2、杂交后倒掉亲本时，一定要倒干净，以免造成回交产生实验误差。同样在F1自交后，倒掉F1时一定要倒干净，以免造成F1和F2的混杂产生实验误差；3、本次实验结果测定基因的顺序和并发率等与理论值完全不同，说明实验中存在存在误差的地方太多，导致最后出现了错误：（1）由于三隐性个体果蝇的生存力很弱，在幼虫密度较高时易在自然选择中被淘汰，在实验中此因素也有可能引起误差。这一点在红小直和白小卷的数量对比中可以明显地看出。（2）数量还是太少，进行三点测交需要大量的数量，实验数据越多越精确，本次实验中果蝇数目有限。（3）观察果蝇时，有一些观察不到放走的，死掉的或者没有观察清楚的，判断失误的（小翅与长翅很容易判断错误，且判断时主观性较大）。