牵出技术在蛋白质相互作用研究中的应用 - 中国教育干部网络学院.pdf

《生命的化学》2011 年31 卷2 期 · 292 · ●Technique and Method CHEMISTRY OF LIFE 2011，31(2) 文章编号: 1000-1336(2011)02-0292-06 牵出技术在蛋白质相互作用研究中的应用 易 欣　柳晓磊　胡美英 华南农业大学昆虫毒理研究室，广州510642 摘要：蛋白质与蛋白质的相互作用参与生命体内的许多生物学过程，关于蛋白质相互作用的研究是人们了解蛋白质功能、揭开 生命奥秘的关键所在。牵出(pull-down)技术作为一种简单、经济、行之有效的一种体外验证蛋白质与蛋白质之间的相互作用的 实验技术，近几年受到了科研人员的青睐。本文阐述了该技术的基本原理和技术特点，总结了近年来牵出技术在生命科学领域 中的应用情况，以及由此衍生的新技术的研究进展。 关键词：牵出(pull-down)技术；蛋白质相互作用 中图分类号：Q51 在所有生命活动中，蛋白质之间的相互作用是 蛋白质纯化外，它也使蛋白质的定位和检测变得更 必不可少的，是细胞进行一切代谢活动的基础。虽 加简便、精确和快速，并可以运用到体内生物事件 然有一些蛋白质可以以单体的形式发挥作用，但是 的可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白 大部分的蛋白质都是通过与伴侣分子共同作用或与 质的可溶性及稳定性等多个方面的研究[2-7] 。本文阐 [1] 其他蛋白质形成复合物来发挥作用的 。蛋白质与蛋 述了该技术的基本原理和技术特点，总结了近年来 白质的相互作用控制着生命的各个过程，是整个生 牵出技术在生命科学领域中的应用情况，以及由此 命体结构和生命活动的基础和特征。研究蛋白质和 衍生的新技术的最新研究进展，并展望了牵出技术 蛋白质之间的相互作用不仅可从分子水平揭示蛋白 的应用前景。 质的功能，而且对于揭示生长、发育、分化和凋亡 1. 牵出技术原理 等生命活动规律至关重要。 牵出技术是 世纪末兴起的一种基于报告基因 20 传统的研究蛋白质相互作用的方法有酵母双杂 的重组DNA 技术，它的发展最初是为了简化蛋白质 交(yeast two-hybrid)、免疫共沉淀(co-immunoprecipi- 的纯化，即通过重组蛋白质所含融合标签同固相介 tation) 、免疫共定位(immuno-colocalization)等。随着 质中配体的特异相互作用，实现重组蛋白质的亲和 表达系统的多样性，包括可以进行培养的细菌、酵 纯化。这已为大量的实验所证实。近几年，随着一 母、植物、哺乳动物以及转基因植物和动物，每个系 些新的融合标签系统的开发，其功能也日渐多样 统都有其各自的特点，因此对实验技术的要求大大提 化。 高。由于表达蛋白质和亲和柱的配基之间存在高特异 牵出技术利用蛋白质之间的亲和性，如酶与底 性的结合，使得牵出(pull-down)技术可以较为直接的 物 谷胱甘肽与谷胱甘肽转移酶 或抗原与抗体 蛋 ( ) (Myc 验证各种复杂表达系