jsrv 衣壳蛋白单克隆抗体的制备及免疫学鉴定 - 生物化学与生物物理 .pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(1): 108~ 114 JSRV 壳蛋白单克隆抗体的制备及免疫学鉴定* 1, 2) 1) 1) 3) 1)** 罗军荣 斯日古楞 刘霄卉 周建华 马学恩 1) 2) ( 蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特 0100 18； 江西农业大学动科院，南昌330045 ； 3) 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨 150001) 摘要 经纯化的JSRV-CA 融合蛋白乳化后免疫Balb/c 小鼠，四免后，取其脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融 合 最终获得了三株稳定分泌单克隆抗体的细胞系 同时，分段克隆绵羊肺腺瘤病毒 基因并构建原核表达质粒，在 ca E coli BL21 中诱导表达 以获得的三株抗JSRV-CA 蛋白的单克隆细胞分泌的McAb 为一抗，应用Western blot 对分段表达 的CA 蛋白进行肽探针扫描，初步鉴定了三株单抗识别的线性表位，并应用非竞争性ELISA 法测定了三株单抗的功能性亲和 常数 为建立特异性的病原诊断方法、分析CA 蛋白的功能及疫苗设计奠定了基础 关键词 绵羊肺腺瘤病毒，表位，衣壳蛋白，抗体亲和力，单克隆抗体 学科分类号 Q7 ，S852.4.3 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2008.00339 绵羊肺腺瘤病(ovine pulmonary adenomatosis， 是JSRV 的标准抗原[7, 8] 更令人惊讶的是，人类肺 OPA ) 又名 “驱赶病”(Jaagsiekte)，是引起绵羊肺 癌与JSRV 相关蛋白的抗体有抗原交叉反应，30% 脏肿瘤的一种接触性传染病，也发生于山羊 绵羊 的BAC 病例及26% 的肺腺癌病例的病料能被抗 [9] [10] 肺腺瘤病病毒(Jaagsiekte retrovirus ，JSRV) 为病原， JSRV-CA 的血清所识别 并且，Morozov 等 发 属 反转录病毒，为线性单股正链RNA ，全长 现与JSRV 相关的序列存在 非洲健康人群及HIV 7.4 kb ，编码相互重叠的 、 、 、 基 阳性人群的基因组中，但调查的几例肺癌患者中没 gag p ro p ol env [1] 因 该病最早 1825 年报道 非洲，主要病征 有发现相关的序列 为患羊咳嗽、呼吸困难、消瘦、大量浆液性鼻漏、 鉴 以上情况，本研究以纯化的CA 蛋白为抗 域型肺泡上皮细胞和无纤毛细支气管上皮细胞肿瘤 原，筛选制备稳定分泌抗JSRV-CA 单克隆抗体的 性增生[2 ～4] OPA 与人的细支气管 - 肺泡癌 细胞系，并应用Pepscan 技术，通过表达连续的重 (bronchiolo-alveolar carcinoma ，BAC) 在临床症状、 叠短肽，与特异性单克隆抗体反应，经Western 影像学及病理组织学特征方面极为相似，为人类这 blot 检测，确定阳性反应片段，从而初步鉴定了三 一常见癌症提供了研究模型[5] 株单抗识别的线性表位，并应用非竞争性ELISA OPA