热处理肿瘤细胞抗原负载树突细胞抗小鼠结肠癌效应 - 中国科学.pdf

中国科学 C 辑 :生命科学 2008 年 第 38 卷 第 12 期 : 1109 ~ 1113 SCIENCE IN CHINA PRESS 热处理肿瘤细胞抗原负载树突细胞抗小鼠结肠癌 效应 ① ② ① ② ② 应敏刚 , 郑秋红 , 刘胜 , 龚福生 , 谢云青 ① 福建省肿瘤医院腹部外科, 福州 350014; ② 福建省肿瘤医院肿瘤外科研究室, 福州 350014 E-mail: yingmingang@ 收稿日期: 2008-04-10; 接受日期: 2008-10-17 福建省科技计划重点项目(批准号: 2007Y0014)资助 摘要 研究了热处理肿瘤细胞抗原负载骨髓来源的树突细胞(dendritic cell, DC)对结肠癌小 关键词 鼠的治疗作用. 将小鼠结肠癌细胞CT26 热处理后超声破膜, 以其细胞裂解液负载BALB/c 小 树突细胞 鼠骨髓来源的DC, 观察 DC 诱导肿瘤特异性细胞毒性 T 淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, 热处理 CTL)杀伤活性; 并将 DC 接种于荷瘤小鼠皮下, 观察其对肿瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠 结肠癌 抗原致敏 生存期的影响. 发现致敏DC 诱导的CTL 对CT26 肿瘤细胞具有显著的杀伤作用. 用致敏DC 免疫小鼠后，对小鼠肿瘤的生长具有显著的抑制作用, 并能显著延长荷瘤小鼠的生存时间. 热 处理肿瘤细胞抗原负载的树突细胞对结肠癌小鼠具有显著的治疗效果. 树突细胞(dendritic cell, DC)是体内最强的抗原 偶氮唑盐(MTT)购自 Gibco 公司; 小鼠淋巴细胞分离 提呈细胞(antigen presenting cell, APC), 也是唯一能 液购于天津市灏洋生物制品科技有限责任公司. 激活初始型T细胞的APC, 其在激发免疫反应中起关 1.2 瘤株与实验动物 键作用. 应用肿瘤抗原致敏的DC 即DC疫苗, 可望成 为肿瘤免疫治疗的有效手段[1,2]. 热处理肿瘤细胞，可 小鼠结肠未分化腺癌细胞株(CT26), 购于中南 提高肿瘤细胞的免疫原性, 进而增强肿瘤细胞负载 大学湘雅医学院肿瘤研究所; 小鼠胃癌细胞(MFC), 的DC 的抗肿瘤免疫效应[3,4]. 本实验使用热处理肿瘤 购于中国科学院上海生命科学研究院; BALB/c 鼠, 细胞抗原负载树突细胞, 发现其对结肠癌小鼠具有 清洁级, 6~8 周龄, 体重 18~22 g, 购于厦门大学抗癌 明显的治疗作用. 研究中心动物室. 1 材料与方法 1.3 CT26 细胞热处理抗原及其冻融抗原的制备[5] 1.1 试剂 将对数生长期CT26 细胞移至恒温箱中, 43℃处 理 12 h后, 移回培养箱. 在 5 CO2, 37℃条件下培养 rmGM-CSF( 重组小鼠粒- 巨噬细胞集落刺激因 子) 、rmIL-4(重组小鼠白细胞介素-4)、PE -大鼠抗小 2 h. 弃培养液, 加入 0.25 胰酶消化, 生理盐水重悬 鼠CD80 mAb、FITC -大鼠抗小鼠 CD11c mAb, 购于 细胞, 将细胞移至离心管中, 2500×g离心 5 min, 弃上 晶美生物工程有限公司; RPMI