聚乙二醇共沉复溶双水相法提纯氯过氧化物酶的 - 上海师范大学学报.pdf

( ) 第 3 9卷 第 4期 　　　　　　　　　　 　　　　　上海师范大学学报 自然科学版 Vol. 3 9 , No. 4 ( ) 2 0 1 0 年 8 月　　　　　　　　　　 Jou rnal of Shanghai Norm al Un iversity N atural Sciences A ug. , 2 0 1 0 聚乙二醇共沉复溶双水相法提纯 氯过氧化物酶的条件研究 朱旭国, 许甜甜 , 杜 　宁 , 李 　焱 , 卢 　轶 , 陈　军 (上海师范大学 生命与环境科学学院 ,上海 200234) 摘 　要 : 来源于海洋真菌 Ca lda riom y ces f um ag o 的氯过氧化物酶是一种用途广泛的氧化酶 , 由 于它在生物合成过程中浓度积累低 、活力稳定性差 ,高纯度酶提纯过程回收率低 ,价格昂贵等 原因限制了氯过氧化物酶的应用. 利用亲水聚合物 PEG 6000在高离子强度下失水沉淀夹带酶 蛋白特点 ,结合 PEG/ (NH ) SO 双水相萃取得到高浓度酶蛋白,再经 Sep hadex G75柱层析纯 4 2 4 ( ) 化可得到高纯度酶样品. 结果显示 : 60%饱和度的 NH SO 溶液可使 PEG 6000 夹带沉淀出 4 2 4 总酶活力 95%的氯过氧化物酶 ,酶在 PEG / (NH ) SO 双水相系统中上下相分配率 k 可以达到 4 2 4 0. 228 以下 , 回收率达到 65. 2 % ,纯度提高了 7. 4 倍 ,柱层析后酶纯度只略有提高 ,总回收率稍 有下降. 研究结果为低浓度生物活性物质的高效率提取提供了新的途径. 关键词 : 氯过氧化物酶 ; 共沉淀 ; 双水相系统 ; 提取纯化 中图分类号 : TQ920 - 6　　文献标识码 : A 　　文章编号 : (20 10) 04 04 1506 0　引　言 ( ) 氯过氧化物酶 Ch lorop eroxida se, EC 1. 11. 1. 10 , CPO 分子为一种血红素糖蛋 白,其辅基是高铁 ( ) [ 1, 2 ] IX 原卟啉 ,它的许多光谱学和化学性质都与细胞色素 P450 高度相似 ,而过氧化物酶本身又具有 类似过氧化氢酶的结合位点 ,因此 , CPO 具有较为广泛的底物适应性 ,可以催化多种物质进行过氧化反 应 ,如 :能够催化卤素离子 、芳香族化合物 、脂肪族化合物和醇类化合物等进行过氧化反应 [ 3 - 6 ] . 目前 , CPO 已经被应用到多种手性化合物合成和药物生产中 , 以减少反应过程中手性异构体的损失 ,去除药