培养基组分及操作参数对抗体多聚体形成的影响 - 江苏农业科学.pdfVIP

江苏农业科学　２０１５年第４３卷第２期 — ２９— 王　杰，肖　政，范　里，等．培养基组分及操作参数对抗体多聚体形成的影响［Ｊ］．江苏农业科学，２０１５，４３（２）：２９－３２． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１５．０２．００９ 培养基组分及操作参数对抗体多聚体形成的影响 １ １ １ ２ １ １ 王　杰 ，肖　政 ，范　里 ，邓献存 ，刘旭平 ，谭文松 （１．华东理工大学生物反应器国家重点实验室，上海２００２３７；２．浙江海正药业股份有限公司，浙江台州３１８０００） 　　摘要：近年来，国家食品药品监督管理局基于药物安全性的考虑对于治疗性蛋白的质量提出了更高的要求，而蛋 白多聚体能引起人体免疫反应，被认为是关键质量属性（ｃｒｉｔｉｃａｌｑｕａｌｉｔｙａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ，ＣＱＡ）。采用培养基组分添加试验和 操作参数控制试验的方法，系统研究了培养基中氧化还原物质和培养过程参数（温度和ｐＨ值）对抗体多聚体形成的 影响。结果表明，半胱氨酸的添加能显著抑制多聚体的形成，培养基中半胱氨酸添加浓度增至３０ｍｍｏｌ／Ｌ，多聚体含 量下降４０％。而铜离子的添加浓度从５００ ｍｏｌ／Ｌ降至０ ｍｏｌ／Ｌ，多聚体含量则降低了４３％。培养温度从３５℃降低 μ μ 至３２℃，重链结合蛋白（ＢｉＰ）和蛋白二硫键异构酶（ＰＤＩ）的表达水平均提高了８９％，细胞翻译后修饰能力显著加强， 分泌至上清液中的抗体多聚体含量相应下降了３８％。研究结果明确了生产工艺和产品关键属性之间的关系，为后续 设计优化以质量为先导的培养过程，生产质量可控、安全、有效抗体药物奠定了基础。 　　关键词：单克隆抗体；多聚体；氧化还原；操作参数；培养基组分 　　中图分类号：Ｑ９４３．１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１５）０２－００２９－０４ 　　２１世纪以来，食品药品监督管理局对治疗性蛋白药物安 发生在内质网中，内质网的氧化还原电势将直接影响到抗体 全性和功效性要求不断提高，质量监测和控制成为动物细胞 二硫键的连接。培养过程中的控制参数（ｐＨ值和温度）已被 大规模培养过程中的研究热点，美国药物与食品监管局和欧 广泛证明会影响细胞生理状态，影响抗体表达，折叠和翻译后 洲药物局于２００４年提出了在所有的药物开发生产中补充质 修饰，Ｙｏｏｎ等报道，降低培养温度至３３．５℃，使ＥＰＯ的比生 ［１］ ［４］ 量设计（ｑｕａｌｉｔｙｂｙｄｅｓｉｇｎ，ＱｂＤ）理念 。 成速率提高了４倍，使ＥＰＯ的产量提高了２．４倍 。Ｍｕｔｈｉｎｇ 多聚体含量是蛋白药物关键质量属性（ＣＱＡ）之一，越来 等报道ｐＨ值影响了杂交瘤细胞表达的单克隆抗体的半乳糖 ［５］ 越受到人们的关注。生产过程中形成的蛋白多聚物会影响最 和唾液酸的含量 。抗体分泌到胞外后已正确连接的二硫 ［６］ 终产品安全性和功效性。Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ指出蛋白多聚体是免疫 键又会被氧化还原物质还原和重构，形成蛋白多聚体 。而 反应的强力诱导者，仅１０％的多聚体含量就会引发人的免疫 为防止因活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ，ＲＯＳ）引起的细胞凋 反应，甚至导致人的死亡，因此要严格控制生产过程中多聚体 亡，培养基中一般均会添加谷胱甘肽、Ｎ－乙酰半胱