基于启动子和宿主改造的酿酒酵母表达系统优化研究 - 天恩泽.pdfVIP

China Biotechnology ，2015 ，35 (1): 中国生物工程杂志 61-66 DOI :10． 13523 /j． cb． 基于启动子和宿主改造的酿酒酵母表达 系统优化研究* ＊ 张 旭 王晶晶 刘建平 ＊ ( 学生命科学学院遗传工程国家重点实验室 上海 200433) 复旦大 摘要 生物医药领域中一套高效表达系统对于重组蛋白的生产至关 。 重要 酿酒酵母作为一种食 ， 、 、 ， 品级真核微生物 具有繁殖迅速 培养简单 遗传操作便捷等特点 是生产重组蛋白较理想的表达 。 pHＲ 。 PCＲ 系统之一 对实验室已有的 酿酒酵母表达系统进行优化 分别通过易错 技术和菌株 P 和 Y16 ， 、 诱变技术对酿酒酵母启动子 TEF 宿主酿酒酵母 进行突变改造 经筛选 鉴定获得表达性能 P 和酿酒 Y16-E14 、Y16-E19 。 ， P 构建以Y16-E14 提高的启动子 TEFV1 酵母 随后 利用启动子 TEFV1 为宿 pHＲ-N ， ， 主的 酿酒酵母表达系统 以绿色荧光蛋白和人血清白蛋白为对象 比较表达系统改造前后 。 pHＲ-N 性能变化 结果显示 酿酒酵母表达系统无论胞内表达绿色荧光蛋白还是分泌表达人血清 白蛋白的能力均较改造前明显提高。pHＲ-N 系统为获得更多具有重要应用价值的重组蛋白提供 了有利的工具。 关键词 酿酒酵母 表达系统 启动子 宿主 优化改造 中图分类号 Q815 酿 母(Saccharomyces cerevisiae )是一种低等单 ， ， 酒酵 复合诱变 获得了一定数量的正突变株 其中产能提高 ， 、 、 、 1 16% ， 细胞真核生物 具有安全 生长繁殖快 培养简单 遗传 最高的 株发酵物中海藻糖含量达到 比出发菌 ［4］ ， 、 、 ， 操作便捷等特点 广泛应用于酿造 食品 医药等领域 株提高了10% 。 。 一直是基础和应用研究的重要对象 酿酒酵母系统是 (promoter ) 5 ＇ ， 启动子 位于结构基因