蛙虹彩病毒cop基因的克隆表达及亚细胞定位.pdfVIP

维普资讯 第 53卷 第 2期 武汉大学学报 (理学版) Vo1．53 No．2 2007年 4月 J．W uhanUniv．(Nat．Sci．Ed．) Apr．2007．193～ 197 文章编号：1671—8836(2007)02—0193—05 蛙虹彩病毒 cop基因的克隆表达及亚细胞定位 柯 飞 ，赵 哲 ，张奇亚 ¨ (1．中国科学院 水生生物研究所／淡水生态与生物技术国家重点实验室，湖北 武汉 430072； 2．中国科学院 研究生院，北京 100049) 摘 要：从蛙虹彩病毒 (Ranagryliovirus，RGV)基 因组 中克隆了含凋亡相关结构域 的新基 因一cop(Caspase recruitmentdomainonlyprotein，COP)基因的全部编码区，成功构建了重组表达载体，进行了原核表达，并在鲤鱼 上皮瘤细胞 (Epitheliomapapulosumcyprini，EPC)中进 行 了亚细胞定位 ．序列分析表 明，RGVcop基 因全长 288bp，编码一个长为 95aa，分子量为 10．4 ×10 的推定蛋 白．二级结构预测表 明其含有 5个 n螺旋 ．同源 性 比对分析显示 ，RGVcop与其他 6株虹彩病毒及人类 cop相关蛋 白同源性最高为 94 ，最低为 33 ．重组 原核表达质粒 pET28a—COP转化大肠杆菌 BI21后 ，经 IPTG诱导表达 ，获得一条约 14×10。的融合蛋 白．重 组真核表达质粒 pEGFPN3一COP转染 EPC细胞 ，经 DAPI染色后 ，在荧光显微镜下观察显示重组蛋 白在整个 细胞 中均有分布 ． 关 键 词 ：蛙虹彩病毒 ；凋亡相关结构域 ；亚细胞定位 中图分类号 ：Q 78 文献标识码 ：A (Caspaserecruitmentdomain，CARD)的小分子量 0 引 言 蛋白，CARD结构域主要在凋亡信号通路 中发挥作 用．对人 cop基 因的研究表 明，COP的主要功能是 虹彩病毒 (iiridovirus)是许多重要 的水生经济 通过其 CARD结构域调节 白介素一1(Interleukin一 动物疾病的病原之一，由其引起的水生动物高发病 1，IL—lZ)分泌 口 ]，并且可以抑制细胞 的凋亡r1引． 率和高死亡率 ，给世界水产养殖业带来 了很大威 胁l1]，因而受到人们越来越多的关注．有关虹彩 蛙虹彩病毒感染宿主后也可以引起宿主细胞 的凋 亡 ]，在此过程中，病毒 自身编码 的COP蛋 白是否 病毒病原的分离鉴定 ，形态发生 ，病毒 的转录复制 等研究 已取得 明显进展 ]．而对于该病毒与宿主 也起到了调节作用，值得深入探讨．本研究从蛙虹 相互作用的分子机理 目前也 已有一些相关报道 ，尤 彩病毒 RGV9506基 因组 中克隆出 cop基 因，并成 其值得关注的是一些由病毒 自身编码 的细胞蛋 白同 功构建了重组质粒 ，进行了原核表达 ，亚细胞定位以 源类似物 ]．这些细胞蛋 白同源类似物除了与病 及计算机辅助分析． 毒复制、转录及核酸代谢相关 的酶类外 ]，还包括 与宿主细胞周期 、免疫系统调节相关 的蛋 白[9,103． 1 材料和方法 开展这些细胞同源类似物 的研究对 阐明虹彩病毒感 染及致病的分子机制具有重要意义．Willi