编号：生物农药研究中心[2006-05-05], 共 3 页 承担单位：福建省农科院 .doc

编号：[2006-05-05], 共页 承担单位：福建省农科院生物技术研究所 课题编号： 课题名称： 课题负责： 子课题名： 子课题号： 子课题人： 子项目名： 试验项目：低浓度乙醇去除JK-2菌发酵液粗多糖溶液中核酸与小分子蛋白的研究（JK-2多糖分析-Ⅰ） 试验人员：张秋芳 试验负责：张秋芳 报告日期：2006年5月05日 计数月份：2006.4（2） 福建省农业科学院生物技术研究所 生物农药研究中心 电话: 0591 传真: 0591 1试验目的 糖是存在于所有生物体中的一类独特物质。随着对糖类认识的深入，近年来大量的实验结果揭示了糖类是携带着最大信息量的一类具有生理活性的高分子物质。细菌胞外多糖（Exotracelluar polysaccharide,EPS），是指细菌在生长、代谢过程中分泌到细胞外的粘液或夹膜多糖，成分和结构复杂，具有调节和增强免疫功能、具抗肿瘤、抗感染、抗炎等多种功效[1，2]。同时在微生物与植物互作过程中，细菌的胞外多糖无论在识别，还是在结合中都起重要信号分子作用，在有些生物系统中，EPS还具有调节作用[3]。 本课题组筛选到的作物枯萎病尖孢镰刀菌拮抗菌株JK-2菌株抑菌效果特别显著[4],且其发酵液番茄枯萎病菌抑制作用活性指标r/min恒温摇床振荡培养48h后,发酵液用。 粗多糖液的制备： 将菌液于10000rpm下离心10min，离心后，取上清液，并将上清液用装有2.5μm膜的针筒过滤器过滤后，用旋转蒸发仪于50℃水浴下进行真空浓缩后，制得胞外粗多糖溶液，备用。 2.2.2 低浓度乙醇去除发酵液的条件优化 初步试验表明，发酵液中核酸的去除与所加乙醇浓度、离心速率和离心时间较大的关系。为此，选取上述三因素进行条件优化试验。试验采用三因素三水平正交试验方案L9（34），正交方案见表1。 每处理移取胞外粗多糖溶液2ml于10ml离心管中后，分别加入3倍体积的各浓度乙醇溶液，于4℃下静置过夜后，进行如表1所示处理，取上清液，进行核酸、蛋白质和总多糖浓度的测定。 表1. L9(34)正交试验和水平 水 平 因 素 A:乙醇浓度 (%) B:离心速率(rpm) C:离心时间（min） 1 20 7000 8 2 25 10000 12 3 30 13000 16 2.2.3 核酸和蛋白质浓度测定 采用紫外吸收法 [9] ，于波长260nm处测定上清液核酸含量，波长280nm处测定上清液蛋白质含量。 2.2.4 总糖浓度测定 采用苯酚―硫酸法测定[9] 。即上清液中的糖与硫酸反应出现橙黄色后,于490nm处比色测定。 3．试验结果 表2. L9(34)正交试验结果及其分析 序 号 A：乙醇浓度 (%) B：离心速率(rpm) C:离心时间（min） 核酸 ABS260 蛋白质 ABS280 多糖 ABS490 1 A1B1C1 20 7000 8 3.972 3.340 1.088 2A1B2C2 20 10000 12 3.286 2.812 1.050 3 A1B3C3 20 13000 16 3.076 2.641 0.936 4 A2B1C2 25 7000 8 3.613 3.084 1.033 5A2B2C3 25 10000 12 3.215 2.745 0.936 6A2B3C1 25 13000 16 3.076 2.659 1.033 7A3B1C3 30 7000 8 3.326 2.853 1.110 8A3B2C1 30 10000 12 3.369 2.853 1.110 9A3B3C2 30 13000 16 3.437 2.925 1.157 核酸 ABS260 蛋白质 ABS280 多糖 ABS490 核酸 ABS260 蛋白质 ABS280 多糖 ABS490 核酸 ABS260 蛋白质 ABS280 多糖 ABS490 K1 10.334 8.793 3.074 10.911 9.277 3.231 10.417 8.852 3.231 K2 9.904 8.488 3.002 9.354 8.410 3.096 10.336 8.821 3.240 K3 10.132 8.631 3.377 9.589 8.225 3.126 9.617 8.239 2.982 K1/3 3.445 2.931 1.025 3.637 3.092 1.073 3.472 2.951 1.077 K2/3 3.301 2.829 1.001 3.118 2.803 1.032 3.445 2.940 1.080 K3/3 3.377 2.877 1.126 3.196 2.742