黑睛排斥汤防治角膜移植免疫排斥反应的基础探究.pdfVIP

提 要 目的：探讨黒睛排斥汤在高危角膜移植免疫排斥反应中的作用及其机制 方法：1、观察灌服黑睛排斥汤对大鼠同种异体角膜移植免疫排斥反应的影响; 并与灌服 CsA 组、黑睛排斥汤+CsA 联合组比较，观察其效果，为临床防治角膜移植 排斥反应提供有效用药方案。 缝线法诱导角膜新生血管，以Wistar大鼠为受体，SD大鼠为供体建立同种异体 高危角膜移植动物模型，随机分组(A～D 共 4 组)。其中 A 组为对照组;B 组为灌服 CsA( l 0mg/Kg/d)组，C 组为灌服黒睛排斥汤 4g/Kg/d 组，D 组为灌服黒睛排斥汤 4g/Kg/d+ CsA( l0mg/Kg/d)组，用裂隙灯显微镜观察记录角膜植片透明度、水肿度、 新生血管度、移植排斥指数(RI)及角膜植片存活时间,得出结果做统计学处理。术后 第15天每组随机处死4只大鼠做角膜病理检查,用光学显微镜和显微照相仪分析系统 观察计数各组角膜植片中炎性细胞浸润情况，细胞数值做统计分析。术后第 30 天做 肝脏和肾脏病理检查,评价药物毒性。 2、黑睛排斥汤抑制高危角膜移植免疫排斥作用的机理研究 缝线法诱导角膜新生血管，以Wistar大鼠为受体，SD大鼠为供体建立同种异体 高危角膜移植动物模型，分为(A～C组)，其中A为模型对照组；B为灌服黒睛排斥汤 4g/Kg/d组；C为灌服黒睛排斥汤4 g/Kg/d+ CsA( l0mg/Kg/d)组。角膜移植术后第7、 + + 14、21天大鼠断尾取血，用流式细胞分析仪检测外周血中的CD4 、CD8 淋巴细胞的百 + + 分比及CD4 /CD8 的比值，做统计学处理。各组于术后25天无菌取脾，制备脾淋巴细 胞悬液，行大鼠脾淋巴细胞增殖反应检测，做统计学处理。 结果： 1、观察灌服黑睛排斥汤对大鼠同种异体角膜移植免疫排斥反应的影响。 （1）从对新生血管的抑制来看，灌服中药组和联合用药组均能有效抑制新生血 管，从总的抑制角膜移植排斥反应的效应看，口服中药组可有效的防治角膜移植排斥 反应，联合用药组效果要优于单一用药组，从角膜植片的存活时间以及生存曲线可看 出:对照组角膜移植片存活时间最短，平均 10.38±1.69 天，灌服黒睛排斥汤 4mg/Kg/d+ Cs A( l0mg/Kg/d)组最长，平均22.5±3.07天。 （2）病理检查:HE染色，对照A组角膜可见植片水肿，新生血管长入。角膜基 质中有大量的炎性细胞浸润，B、C 组可见角膜植片基质中有少量的炎性细胞侵润及 新生血管形成。D组几乎没有炎性细胞侵润和新生血管。肝脏和肾脏的病理检查未见 明显异常。 （3）病理细胞计数中性粒细胞和淋巴细胞各用药组细胞数下降与 A 对照组比较 有明显差异。 2、黑睛排斥汤抑制高危角膜移植免疫排斥作用的机理研究 + + + （1）外周血淋巴细胞对比结果如下: 术后 7 天，C 组 CD4 , CD4 /CD8 与 A 组比 较明显降低（P0.05）；术后14天，B、C组CD4+较A组明显下降（P0.05）；术后21 天，B、C 组CD4+ + + + 、CD4 /CD8 与A组比较明显降低（P0.01），但各组 CD8 比较无明显 差异。 （2）脾淋巴细胞增殖反应结果如下：B、C组较A组T 淋巴细胞增殖反应明显受 抑制（P0.01），其中以C组更为明显。 结论： 1、黑睛排斥汤具有明显的抗炎作用,能减少术后新生血管长入角膜。 2、黒睛排斥汤具有一定的延长角膜移植片存活时间的效应:与环抱霉素A具有互 相协同作用，这对临床防治角膜移植免疫排斥反应具有一定的参考价值。 3、黒睛排斥汤可有效抑制角膜移植术后外周血中 CD4+T 淋巴细胞活化表达，降 + + 低CD4