IL-1β在真菌性角膜炎中的表达及调控机制研究.pdfVIP

摘要 B(Interleukin一1B，IL一1B)在真菌性角膜炎 目的：探讨炎症因子白介素-1 中的表达及其分子调控机制。 方法：采用基质内注射法建立小鼠真菌性角膜炎模型，以此作为大体水平的研究 对象；获取小鼠骨髓中性粒细胞，以此作为细胞水平的研究对象。实验分为四部 分：(1)建立C57BL／6小鼠真菌性角膜炎模型，采用流式细胞术和激光共聚焦显 B的主要细胞来 微镜观察IL一1B在角膜组织的表达，探索真菌性角膜炎时IL一1 同培养，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western—blot法检测工L一1p的表达， 探索真菌性角膜炎时经典Signal1通路对IL—lD的调控作用；(3)建立C57BL／6、 菌共同培养，采用ELISA和Western—blot法检测IL—lB的表达，探索真菌性角 膜炎时经典Signal2通路对工L—l 测IL一1 1 对工L—lB的调控作用。 结果：(1)C57BL／6小鼠感染烟曲霉菌24h后，可见大量募集至角膜感染区域的 中性粒细胞；所有能够表达IL一1 B的细胞中，92．2％的是中性粒细胞；中性粒细 胞中能够表达IL—lB的比例为85．4％。感染烟曲霉菌48h后，角膜区域出现较高 比例的巨噬细胞；所有能够表达工L一1B的细胞中，29．7％的是巨噬细胞；巨噬细 胞中能够表达IL一1 B的比例为96．6％。(2)Signal1通路预激活后给予真菌刺 激，C57BL／6小鼠中性粒细胞中pro—IL一1B的表达量明显增加，未预激活而只单 纯给予真菌刺激，pro—IL-1B的表达量也明显增加，但与有预激相比其增加幅度 B的表达较未感染时明显增多，但是与C57BL／6小鼠相比无明显差异。(3) ～㈣ 4h后，pro—IL—l B和matureIL-1 ASC一／一小鼠角膜中pro—IL—l B的表达量无明显差异， IL一1 Caspase一卜／一小鼠角膜中pro～IL一1B的表达量无明显差异，但是matureB 的表达量明显低于C57BL／6小鼠；NLRP3-／-并D ASC一／一小鼠的中性粒细胞被真菌 IL一1 刺激4h后，pro—IL一1$和mature B的表达量与C57BL／6小鼠相比无明显 胞被真菌刺激4h后，pro—IL一1D的表达量无明显差异，但mature工L～lB的表 达量明显低于C57BL／6小鼠。(4)预先给予Caspase—l1阻断剂的C57BL／6小鼠 B的表达量无明显差异，但 真菌性角膜炎模型，建模24h后其角膜中pro-IL-1 IL-1 是matureB的表达量明显低于未给予阻断剂的C57BL／6小鼠；给予 9 Caspase-1l阻断剂的C57BL／6小鼠的中性粒细胞被真菌刺激4h后，pro一工L—l IL一1 B和mature 的表达量无明显差异，但mature Caspase一1的表达量明显低 于单纯刺激组；随着真菌刺激时间的延长，C57BL／6小鼠中性粒细胞内 l的表达量与C57BL／6小鼠无