EGFP突变G719X及非小细胞肺癌——从基础到临床.pdfVIP

学校代码： 10023 学 号： 200701042 EGFR突变G719X与非小细胞肺癌 …从基础到临床 专业年级： 北京协和医学院临床医学专业2007级 姓 名： 周杰 导 师： 李泽坚教授北京协和医学院 临床学院 北京协和医院胸外科 李单青教授北京协和医学院临床学院 北京协和医院胸外科 完成日期： 2015年6月 万方数据 目录 摘要……………………………………………………………………………………2 Abstract…．…．…．…．…．……．…．…．．…．……．…．…．………．…．……………．…．．……．…．…．…．……．．…．．4 第一章引言…………………………………………………………………………6 第二章实验材料和方法……………………………………………………………15 一实验流程图…………………………………………………………………15 二实验材料和仪器……………………………………………………………16 三实验步骤……………………………………………………………………21 3．1目标蛋白的获得………………………………………………………．21 3．2表面等离子共振技术测蛋白和小分子药物亲和力…………………27 3．3EGFR蛋白酪氨酸激酶活性实验………………………………………32 3．4EGFR基因突变G719X患者随访………………………………………37 第三章实验结果……………………………………………………………………39 一克隆、表达并分离纯化EGFR酪氨酸激酶结构域野生型及各突变蛋白．．39 二表面等离子共振技术测蛋13；FId,分子药物亲和力………………………42 三EGFR蛋白酪氨酸激酶活性实验……………………………………………44 四临床随访……………………………………………………………………48 第四章实验结论与讨论……………………………………………………………52 参考文献……………………………………………………………………………．．56 缩略词表……………………………………………………………………………．．58 致谢……………………………………………………………………………………………………………．71 独创性声明…………………………………………………………………………．．72 1 万方数据 摘要 研究背景：肺癌是世界范围内癌症致死的首位病因。以表皮生长因子受体为靶点 的小分子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR．TKIs)，在含特定EGFR基因突变肺癌患者中 取得了显著的用药反应性以及较好的临床疗效。EGFR基因突变中，以19号外显 物反应最好。相反的，T790M点突变是最常见的TKIs耐药突变。除上述突变外， 突变率较低，且常常倾向于以联合突变的形式存在。充分认识这些突变基因与非 小细胞肺癌发生的关系，以及含有这些突变基因的患者对TKIs药物的反应性， 可以让我们更充分的认识肺癌发病机理，并指导临床实践。 细胞sf9中表达并纯化出野生型及突变蛋白。尝试通过表面等离子共振(SPR) 技术研究蛋白与TKIs亲和力，通过商品化试剂盒探索突变蛋白的激酶活性以及 检测的患者，收集其中含G719X基因突