要点叶绿体色素的提取及理化性质的(定稿)2.pptVIP

六、叶绿素理化性质的观察 (1) 光对叶绿素的破坏作用 在 2支具塞试管中各放入2ml上述色素提取液，盖好塞子。一支试管置暗处，一支试管置强光（如太阳光）下，经2~3h后，取出2支试管观察溶液颜色有无变化，或在分光光度计上测定663nm处吸光度值后进行比较。 (2) 叶绿素的荧光 取 2ml上述色素提取液放入一支小试管中，可在窗口与入射光相垂直的方向观察叶绿素暗红色的荧光 (3) 去镁叶绿素的形成及铜取代作用 取 1~2ml上述提取液放入试管中，小心加入 3ml 6mol/L HCl，摇动后静止观察溶液颜色变化？然后向再逐步加入醋酸铜结晶少许，把试管在酒精灯下微微加热，观察溶液的颜色有何变化？ * （4）黄色素和绿色素的分离： 取5ml色素乙醇提取液加到已装有 10ml石油醚的分液漏斗中，摇动分液漏斗，并沿分液漏斗的壁小心加入 15ml蒸馏水，轻轻转动分液漏斗，加入4~8ml饱和NaCl水溶液，静止几分钟，待分层清楚后，弃去下面的乙醇一水层。再加入 15ml蒸馏水，轻轻晃动分液漏斗，以洗去石油醚中残留的乙醇，弃去水层。然后于色素的石油醚溶液中加入5ml30％NaOH甲醇溶液，用力摇动分液漏斗，静止10min，再加蒸馏水8ml，摇动后静置分离，则得到黄色素和绿色色素层，分别保存于试管中。 * 七、注意事项 1、叶绿体色素对光、温度、氧气环境、酸碱及其它氧化剂都非常敏感。色素的提取和分析一般都要在避光、低温及无酸碱等干扰的情况下进行。 2、使用低沸点易挥发有机溶剂要注意实验室安全。实验室要保持良好的通风条件，不得靠近明火操作。 3、提取液不宜长期存放，必要时应避光低温保存。 * 八、 讨论 研磨叶片提取叶绿体色素时，加入少量碳酸钠有何作用？加多了会出现什么问题？ 叶绿素溶液为什么会发荧光？ 黄色素和绿色素分离的原理？ * 实验结果部分 1、纸色谱分离色素：要求用铅笔绘制出色素经纸色谱分离后的图形，并用注明各色素环的颜色和名称。 2、叶绿素理化性质鉴定：要求写出各个项目的实验现象和并分析其中的原因。见下表 * 叶绿素理化性质鉴定结果 实验项目 实验现象 原 因 光对叶绿素的破坏作用 叶绿素的荧光观察 黄色素与绿色素的分离 去镁叶绿素的形成及铜的取代反应 * 实验报告格式 一、实验名称 二、实验目的 三、实验原理 四、主要仪器设备及耗材 五、实验步骤与方法 六、实验结果 七、思考与练习 * * 叶绿体色素的提取及理化性质的鉴定 授课人: 廖鹏飞 * . 一、实验目的及要求 掌握提取和分离叶绿体中色素的方法 了解叶绿素的物理和化学性质 * 二、相关知识和实验原理 高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括叶绿素a、叶绿素b、β?胡萝卜素和叶黄素四种 。 表6-1 高等植物体内叶绿体色素的种类、颜色及含量 色素名称 项目 叶绿素 类胡萝卜素 叶绿素a 叶绿素b β?胡萝卜素 叶黄素 颜色 蓝绿色 黄绿色 橙黄色 黄色 在叶绿体内各色素含量比例 3 1 2 1 3 1 * 叶绿素(Chlorophylls)是叶绿酸的酯，它在植物进行光合作用中吸收可见光，并将光能转变为化学能。叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。 在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a（C55H72O5N4Mg）和叶绿素b（C55H70O6N4Mg）两种结构相似的形式存在，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的醛基所取代。 叶绿素的基本结构见图6-1 * * 在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环，它们由四个甲烯基联结成卟啉环，在卟啉环中央有一个镁原子，它以两个共价键和两个配位键与四个吡咯环的氮原子结合成内配盐，形成镁卟啉。在叶绿素分子中还有两个羧基，其中一个与甲醇酯化成COOCH3，另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。 脂溶性: 卟啉环头部呈极性, 具亲水性; 叶醇尾部具亲脂性, 难溶于水,仅溶于酒精、丙酮、已醚、已烷等有机溶剂。 * 光学特性 （1）吸收光谱：色素溶液随波长改变而发生光吸收变化的图谱 Chla Chlb的吸收光谱有二个强吸收峰 640——660nm 红光部分 叶绿素特有 410——470nm 蓝紫光部分 卟啉环化合物共有 （2）荧光和磷光 荧光现象：Chl溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现象。强度大，寿命短（10-9秒） 磷光： Chl溶液停止光照后，仍能在一定时间内放出暗红色的光。 寿命长（10-2秒——10-3秒） 叶绿素的物理、化