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蛋白、核酸杂交转印膜(PVDF、尼龙膜)技术介绍
r
e
t
转 t
印膜:用于蛋白质和核酸的转移和检验过程的微孔膜。
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Southernblot:又称Southern印迹杂交,是研究DNA图谱的基本技术。
b
Northernblot:又称Northern印迹杂交,与Southernblot方法类似,是检测RNA
o
的基本技术。 C
Westernblot:又称Western印迹杂交,与Southernblot方法类似,是蛋白质检测
分析的基本技术。
转印膜在蛋白质和核酸的转移和检测过程中应用广泛,不同的转印膜规格和参数不同,
选择正确、均一稳定的转印膜对达到最佳的实验结果起到关键性的作用。
常用的转印膜对比:
常用的三种转印膜:硝酸纤维素膜(NC膜)、带正电的尼龙膜(N66膜)、聚偏氟乙
烯膜(PVDF膜)。
三种转印膜结合DNA或RNA的能力:带正电尼龙膜PVDF膜硝酸纤维素膜。
三种转印膜机械强度比较:硝酸纤维素膜较脆,易破碎,不能重复使用;尼龙膜和PVDF
膜机械强度较高,可重复使用。
带正电的尼龙膜可结合短至10bp核酸片段,因此是最理想的核酸杂交转印膜。
PVDF膜机械强度高、耐高温,是蛋白印迹最理想的转印膜。
Cobetter专为蛋白核酸杂交研发了性能优良的转印膜,Cobetter杂交转印膜的种类如
下: r
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t
t
e
b
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C
N66尼龙转印膜
N66尼龙带正电荷转印膜
PVDF疏水转印膜
PVDF亲水转印膜
Cobetter转印膜孔径有0.45um、0.22um两种。
CobetterN66尼龙转印膜:
r
e
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相比起硝酸纤维素膜而言,其机械强度高,在经历多次杂交、洗脱和标记后不易产
t
生 e
破损和变形,可重复使用,非常适用于核酸检测。
制 b
模过程中通过特殊的表面改性方法嫁接了亲水性的基团,使用过程中不需要再做
预润湿处理。 o
C
通过在膜表面嫁接羟基基团,改变其表面电荷性能(正电),使得其能紧密结合
DNA而降低背景,快速结合DNA。
溶剂兼容性:
能够抵抗普通溶剂,比如丙酮、酒精、氯化脂肪族烃、甲酰胺、2M氢氧化钠、DMSO
以及二甲基甲酰胺。但耐酸能力非常有限,与浓缩蚁酸(50%)、盐酸(4摩尔)、
氧化剂
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