生物：5.3《血红蛋白提取和分离》(新人教版选修1).pptVIP

揪葬祝尖伍花梁唯某幼玩锰倚既鸥咙舱椅玲宪翘甜大吩浑惺纯哲咽淹条缎生物：5.3《血红蛋白提取和分离》(新人教版选修1)生物：5.3《血红蛋白提取和分离》(新人教版选修1);血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。;课题3 血红蛋白的提取和分离;一、基础知识:;一、基础知识--蛋白质提取和分离原理 ;（1）原理： （2）材料;（3）分离过程 ;(一)凝胶色谱法;㈠ 凝胶色谱法（分配色谱法）：;泰忙缕喉狼耿珊匙削输禄晓粘荣冬槐典浙尘中插探旺爽拽督院度嘉祷线始生物：5.3《血红蛋白提取和分离》(新人教版选修1)生物：5.3《血红蛋白提取和分离》(新人教版选修1);1 、什么是缓冲液？;由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成。 如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠，NaH2PO4/Na2HPO4等;1 、什么是电泳？;2．凝胶电泳法：;影响蛋白质分子运动速度的因素;在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电； 加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。 ;电泳检测结果;二、实验操作;（一）样品处理;样品处理;血液组成成分;1.洗 涤 红 细 胞;采集得到鸡血;初次离心后的结果;3次洗涤后的结果;2.释放血红蛋白;(2)血红蛋白的释放：;磁力搅拌器;3.分离血红蛋白;(3)分离血红蛋白溶液：;甲苯层（无色透明）;课题3 血红蛋白的提取与分离;利用透析袋透析;透析过程;课题3 血红蛋白的提取与分离;（二）凝胶色谱操作;装配好的凝胶柱;返回;材料：交联葡聚糖凝胶G-75；20mmol/L磷酸缓冲液 装填:;（2）凝胶色谱柱的装填; ④洗涤平衡：装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液（pH为7.0）充分洗涤平衡12小时。注意：1、洗脱液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。2、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象。 ;3.样品加入与洗脱;3.样品的加入和洗脱;3.样品加入与洗脱;收集得到的纯化后的血红蛋白;课题3 血红蛋白的提取与分离; 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。;三、实验结果分析与评价; 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。;课题3 血红蛋白的提取与分离; 教学反馈 ;5．血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含量最多。 A白细胞 B血小板 C红细胞 D淋巴细胞 6．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（ ）。 A. NaCl B.甲苯 C.蒸馏水 D.柠檬酸钠 7．将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，其中第3层是（ ） A无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物;练习巩固;2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较;3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 A 调节pH B 维持红细胞的能量供应 C 防止微生物生长 D 防止血液凝固;5、一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是 A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、1 6、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是： 有机溶剂-----脂类物质-----血红蛋白溶液------红细胞破碎物沉淀