定序送件注意事项-TechComm,LifeScience.PDFVIP

定序送件注意事項 1.送 Plasmid時要多少量 （以1個反應為單位）。 一個反應至少提供2g （濃度高於100ng/l ，溶於無菌水中 , 勿溶於TE buffer 中）。未知濃度者希望提供 30l ，已知濃度也至少需20l （因需測OD ）。 2. 送定序用之 Primer 需求量： 濃度 10pmol/l （10M ）、（0.1g ）、（100ng/l ） 一個反應至少準備5l ，5個反應需準備 25l 。 3.提供 plate請註明抗生素種類，最好能四區劃線且有單一菌落（ 兩天內新鮮的 plate ）以免繼代培養後，抽出來的plasmid品質 不佳。 4.提供菌液需多少量 2 ~ 4 c.c. （4 c.c.為最佳）或畫在 Plate最好 ；請提供24 小時內新鮮的菌液 ,以 免菌太老 抽出來的, plasmid品質不佳。 5. 本公司樣品之保存 DNA （Plasmid 、PCR etc. ）為2週 ；超過兩週請重新送件 。 6. 送 PCR 產物時要多少量： (1) 20-30ul （需為單一產物；否則會有雜訊…） (2)已純化之 PCR 產物溶在TE buffer 不能做 ，溶在無菌水裡才可以做。 (3)無論有無純化均請附上電泳圖 ，並標示loading量、長度及 annealing temperature 。 7. 如果不是 Single band 需由自行跑膠 並切下欲定序的 template(模板)，回收純化 後再交由本公司定序，提供體積需 20-30l 以上並請附上電泳照片 ，照片上 需有marker ，並註明PCR product Size （請註明跑電泳時所加的marker及 sample量）以供反應參考 。 ※請務必提供PCR 產物之定序用primer ，並註明此primer設計時之 GC content 、Tm值、長度，實際做 PCR時之 annealing溫度。 8.有關基因合成時請提供 序列及 vector （載體）資料作分析之用即可 9. 本公司合成之Primer 約多少OD 40 nmole （約5OD ）；0.2mole （約20OD ）。 明欣生物科技有限公司 台北市南港區園區街3 號10 樓之3 Tel: (02 Fax: (02 E-mail: missiond@ .tw 提供的 PRIMER 序列及種類 5’AOX M13F(-40) RV3 GACTGGTTCCAATTGACAAGC GTTTTCCCAGTCACGAC CTAGCAAAATAGGCTGTCCC 3’AOX M13F(-21) SK GCAAATGGCATTCTGACATC TGTAAAACGACGGCCAGT CGCTCTAGAACTAGTGGATC 5’AD M13R SP6 TACCACTACAATGGATGATG TCACACAGGAAACAGCTATGAC TATTTAGGTGACACTATAG 3’AD Mal E S-tag GTGAACTTGCGGGGTTTTTC GGTCGTCAGACTGTCGAT GAACGCCAGCACATGGACAGC 35S-pro NOS-ter SV40-pro AATCCCACTATCCTTCGCAAGACCC CGCAAGACCGGCAACAGGAT