细胞核蛋白质提取试剂盒NucleoproteinExtractionKit.PDFVIP

细胞核蛋白质提取试剂盒 Nucleoprotein Extraction Kit 品编号：C500009 包装规格：50 Assays 品简介 本试剂盒提供独特的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，能够在非 变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer 对 细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS电泳、Western Blot、免疫共沉 7 淀、EMSA、Pull Down和转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以从10 个培养细胞或200 mg 动物 组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用50次。 h 品特点 c 1. 提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA，转录因子分析的实验。 e 7 2. 可以从50x10 个培养细胞或50x200 mg 动物组织提取核蛋白。 t 3. 整个实验过程只需要45分钟左右。 o 4. 在提取的过程中，最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染。 i 5. 不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。 b 运输和保存条件 常温下运输，在收到 ，将磷酸酶抑制剂，PMSF和DTT在-20℃的环境中保存，其余2-8℃保存，保质期一年。 n 品组成 o 成分 C500009 Lysis Buffer g 10 mL Hypotonic Buffer 50 mL 磷酸酶抑制剂 n 300 L PMSF 600 L DTT a 60 L 操作步骤 s A 实体组织蛋白的提取 1. 在每1mL冷Hypotonic Buffer 加入5 L磷酸酶抑制剂，10 L PMSF和1 L DTT混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 将100-200mg 固体组织置于培养皿中，手术剪将小块充分剪碎，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心，取沉淀后加入0.6 mL冷Hypotonic Buffer混匀， 4 ℃下玻璃匀浆器上下手动匀浆30-50 次。或超声破 碎细胞，每次30 sec，3 4 次，每次间隔1 min，置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞 应镜检，细胞破碎率不小 于90 ％，同时没有明显的组织小块。 3. 转移到1.5 mL 预冷的离心管，手指弹管壁使沉淀悬起，冰浴10 min，震荡10 秒钟，混匀。 4. 在4 ℃，800g (3000 rpm)离心5 min，立即弃上清，再加0.4 mL冷Hypotonic Buffer 震荡洗涤沉淀 30sec，再 4 ℃，2500 g (5000 rpm) 离心5 min，弃掉上清。 在做实验步骤A2-4的过程中，要保持动作的连续性，以免对细胞核的完整性产生影响。 5. 再沉淀中加0.2 mL Lysis Buffer (每1 mL Lysis Buffer 冷加入5 L磷酸酶抑制剂, 10 L PMSF 和1 L DTT ）震荡将沉淀