基于碳纳米材料的微囊藻毒素.docVIP

　　基于碳纳米材料的微囊藻毒素 1微囊藻毒素检测方法的研究进展及本论文的选题依据 1.1MC-LR的危害与污染现状 淡水藻类是水体中低等的单细胞生物，主要包括蓝藻、绿藻、桂藻、甲藻、隐藻、裸藻、金藻、黄藻。通常情况下，这些藻类不会对水体造成危害。但是自上世纪70年代以来，许多含有高浓度氮和憐等营养物质的工业污水、农业污水、生活污水排入环境中，加剧了水环境的污染程度，引起湖泊、河流和水库等水体的生态结构和功能发生变化，水中的藻类(特别是蓝藻)异常且大量地繁殖生长，许多水体频繁发生大面积的蓝藻水华。当蓝藻水华严重时，这些藻类在次级代谢过程中产生的各种蓝藻毒素会释放到水体中，导致水质下降，并可污染饮用水，危及人们的饮用水安全。目前，由水体富营养化引起蓝藻水华的频繁发生已成为国内外普遍关注的水环境问题之一。微囊藻毒素(Microcystins,MCs)是蓝藻水华过程中产生的一种毒性较强的蓝藻毒素，其形成诱因是水体中过量的氮、磷含量[3]。MCs由7种氣基酸组成，种类繁多，分子量为1000 Da左右。在众多的MCs异构体中，微囊藻毒素-LR (Microcystin-LR, MC-LR) 在蓝藻水华时出现的频率最高、产生量最大、危害最严重[4]。MC-LR的分子结构如图1.1所示。在MC-LR结构巾，X和Y分别表示L-亮氨酸和L-精氨酸，其中Adda是MCs分子结构巾与毒性相关的特殊氧基酸。MC-LR的理化性质非常稳定，无臭无味，耐热，耐酸碱，在水巾的溶解度大于1 g/L，挥发性低，不易被沉淀物和悬浮颗粒物吸附。 1.2MC-LR的常规检测方法 为了满足实际检测需求，目前已经建立了几种不同类型的常规检测方法，包括受试动物法、细胞毒性和遗传毒性检测法、仪器分析法、生化分析法等。受试动物法是最早用于分析MC-LR的常规方法，也是评估MC-LR毒理学效应的常规方法。该方法一般先对小鼠进行灌喂或腹腔注射MC-LR，然后通过观察MC-LR产生的毒理学效应来定性分析MC-LR[4]。另外，鱼类[16]、水圣[17]、发光细菌[18]也可作为受试动物对MC-LR进行定性分析。受试动物法虽具有操作简单、直观、快速等优点，但其准确性、灵敏性、选择性较差，并且受试动物的维持费用较高、工作量大，较难对MC-LR进行定量测定。细胞毒性检测法通过测试MC-LR对细胞产生的毒理学效应来分析样本中MC-LR的含量。MC-LR进入细胞后会产生活性氧自由基，诱发细胞内的氧化应激反应，干扰细胞内信号代谢通路，引起DNA损伤，最终导致细胞洞亡。根据MC-LR的这种毒理学效应，Fladmark等利用娃鱼和大鼠的细胞凋亡程度作为MC-LR的定量检测依据。另外，MC-LR还具有遗传毒性，通过鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变试验(Ames试验)得出MC-LR能诱导鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型菌株的DNA发生移码突变，并且Gaudin等_通过彗星实验(et assay)观察到MC-LR处理后的细胞内发生了 DNA的断裂，并通过分析DNA的断裂程度实现了对MC-LR的定量检测。虽然细胞毒性和遗传毒性检测法比受试动物法更准确，但是仍然存在灵敏性和选择性不够理想等问题，并且MC-LR的浓度与细胞或DNA损伤之间的剂量关系有待深入研究。 2基于GQDs/SiNC-LR光电化学免疫传感方法 2.1引言 光电化学(PEC)免疫传感方法利用光源激发光敏试剂产生载流子的分离和迁移，以电子定向迁移产生的光电压或光电流作为检测信号，根据免疫识别过程对光电效应的影响实现目标物的定量分析，是电化学免疫传感方法中一种重要的分析方法。在测试过程中，PEC免疫传感方法可分为独立的光源激发过程和电流响应过程，使激发信号和检测信号互不干扰，从而降低背景噪音，并可提高灵敏度一维有序的半导体纳米阵列材料因具有较强的光电转换效率，是PEC免疫传感方法中最有应用潜力的光敏材料。Chen等以有序Ti02纳米管阵列为基体，通过电沉积聚啦略制备出了阵列式TiOz纳米管分子印迹电极，利用分子印迹膜对MC-LR吸附作用将MC-LR固定在分子印迹电极上。当Ti02受到激发时产生电子和空穴的分离，利用空穴氧化MC-LR，空穴的消耗促进了电子和空穴的分离，产生更多可移动的电子，从而增强光电流响应。根据光电流响应可定量检测MC-LR，线性范围为0.5)ag/L-100mg/L。由于该方法中分子印迹膜对MC-LR异构体的选择性不够理想，需要选择具有更高特异性的识别分子，从而提高PEC传感方法的灵敏性和选择性。抗体(Ab)是一种具有较高识别能力的生物分子，能够与MC-LR发生特异性的结合反应。然而，Ti02等半导体阵列材料上存在的功能基团较少，对Ab的固定效率较低，并且Ti02对激发光源有较高的要求。一般条件下，TiCb仅能在紫外光激发下产生光电流响