肺神经内分泌细胞和其肿瘤的形态学研究.pdf

中文摘要 肺神经内分泌细胞及其肿瘤的形态学研究 摘 要 肺和胃肠道一样，也是一个内分泌器官，存在着一类具有特殊形 态、功能且与神经系统具有密切关系的内分泌细胞群。Fieyter于1938 年观察到并命名的亮细胞是人们最早认识的肺神经内分泌细胞 neuroendocrinecell，PNEC)。在这之后，随着研究手段 (pulmonary 的不断提高，人们对这类细胞的认识逐渐加深。上世纪60年代后期， neuroendocrine 的来源、结构、功能、激素的表达及其与肺神经内分泌肿瘤的关系越 来越引起专家们的重视。 数十种广泛存在于中枢和周围神经的神经活性物质诸如降钙素基 因相关肽(calcitonin gene—related tryptamine，5-HT)、P物质(substanceP，SP)和甲硫氨酸脑啡肽 内也已发现多种具有生物活性作用的肽类或胺类物质。它们对肺的运 动、感觉、分泌、营养、代谢及防御等功能活动具有保护及调节作用， 被认为是中枢神经系统与肺之间的一类重要信息物质。并认为主要来 年来，有学者提出肺自身的调节也应是一个非常重要的环节。从而， 肺自身是否具有合成和分泌某些肽类物质的能力，这些生物活性物质 之间是否具有关联性，如何参与肺的生理、病理过程等问题引起越来 越多学者的关注。 神经肽Y(neuropeptideY，NPV)是近年来众多学者十分关注的神 经递质和神经调质之一，主要存在于弥散神经内分泌系统的中枢部一 ～下丘脑，并与摄食、血压、心率、呼吸调节、平滑肌舒缩以及下丘 脑神经内分泌功能等重要生理过程的调节密切相关，同时NPY也被发 中文摘要 现存在于胰腺等外周器官并被证实有收缩血管的作用。那么NPY是否 也存在于肺内?肺内分泌细胞能否合成NPY?NPY在肺内的作用及 与其他活性物质的关系是怎样的?这成为本课题设计的一个目的。 国内外学者对肺神经内分泌细胞进行的一系列观察和报道发现， 肺神经内分泌细胞在胚胎发育过程中异常活跃，与其在正常成体肺组 织存在很大的差异。因此，对动物肺内NPY、5-HT、CGRP所表达的 增龄变化的观察将有助于我们对肺的发生、发育的全面了解。 A，CgA)作 本课题以嗜铬颗粒蛋白A，即嗜铬素A(chromogranin 为肺神经内分泌细胞的特异性标记物，首先从翻译和转录两方面对 在肺神经内分泌细胞内的关系进行了观察。然后对增龄大鼠肺内 NPY、5-HT和CGRP表达的变化进行了动态观察。 晚近的研究认为，肺神经内分泌肿瘤与胚胎肺发育中神经内分泌 细胞有某些相似之处。因此，我们对NPY在肺神经内分泌肿瘤的表达 进行了观察，以期为肺内分泌肿瘤发生的病理学提供实验资料。 CgA由于能与特异性激素结合而广泛存在于神经内分泌细胞及 其肿瘤的内分泌颗粒中，被认为是神经内分泌细胞和神经内分泌肿瘤 特异、敏感、可靠的标记物。在神经内分泌癌的病理诊断学上具有十 分重要的意义。本实验中用CgA作为肺神经内分泌细胞的特异性标记 与其他标记物在人肺神经内分泌肿癌中阳性表达的情况，以期为肺内 分泌肿瘤的临床病理诊断提供一定的形态学参考。 第一部分：NPY与5-HT、CGRP、CgA在大鼠肺组织的表达 目的：观察大鼠肺内NPY免疫反应阳性物质的表达情况；观察 活性物质之间的关联性，为揭示肺的内分泌机制、进一步认识肺的结 构和功能提供形态学资料。 方法：应用免疫组化单标、免疫荧光双标和原位杂交技术，利用 光镜、透射电镜和激光共聚焦扫描显微镜进行观察、照相。光镜、激 光共聚焦扫描显微镜切片制备：选用健康新生和孕20日SD大鼠各6 只，雌雄不限。新生大鼠结扎气管后迅速断头放血，行Bouin液气管 中文摘要 灌注，再全肺固定1小时。待肺组织稍稍变硬后，选取带有各级支气 管的左上肺组织多块，置入相同的固定液中固定；孕鼠活杀后迅速打 开子宫，取出活胎鼠，打开胸腔取全肺浸入新配制的Bouin液固定。 常规石蜡包埋、连续切片，片厚6u 和CgA为一抗的免疫组织化