影响细胞核移植效率的因素.pdfVIP

韵响知肥孩穆植效卒的因东 周艳华’，贾银海 ，苏 雷z，3 (1．云南农业大学动物遗传育种与繁殖专业，云南 昆明 650201； 2．云南中科胚胎工程中心，云南 昆明 650217； 3．中国科学院昆明动物所，云南 昆明 650213) 中图分类号 $852．1 6+2 文献标识码 A 文章编号 1 672-9692(2008)02-0046-05 1997年，世界上第一只成年绵羊乳腺上皮 胞类型及细胞周期，供体细胞的遗传背景，受体 细胞核移植后代Dolly的诞生f1】，标志着核移植技 胞质，核移植程序以及体外培养系统等，达到提 术进入了一个崭新的发展阶段。这一成就具有跨 高其总体效率的目的。 时代的意义，而且进一步证实了基因活性学说的 1 供体细胞的种类与细胞时相对克隆效率的影 正确性，证明高度分化的体细胞仍然具有基因组 响 的等同性，其细胞核仍然具有支持哺乳动物全程 1．1 细胞种类 供体细胞的组织特异性对克隆 发育的全能性。此后，以不同动物不同组织来源 效率有重要影响，在已经做过的超过2oo种组织 的体细胞进行核移植均得到了后代。这些细胞包 学类型的哺乳动物供体细胞中，只有不到5％的 括颗粒、卵丘细胞、鼠尾尖细胞、乳腺细胞、皮 产下克隆后代。研究表明，不仅不同细胞系，即 肤成纤维细胞、输卵管和子宫上皮细胞、转染或 使是同一原代细胞系的不同克隆株，其核移植胚 未转染的牛生殖嵴细胞、牛肌肉细胞、牛初乳乳 胎的发育率也有差异。一般认为，用雌性生殖系 腺上皮细胞、肺组织细胞、兔子成纤维细胞等。 统的细胞作供核体可提高体细胞核移植效率。来 目前克隆研究主要集中在如何提高动物克隆的效 自胚胎干细胞的克隆胚不需或几乎不需重编程， 率上。至目前为止，据发表资料来看，对于已获 故而发育超过附植期的胚远好于来自体细胞的克 得成功的体细胞克隆动物，其总体效率仍然较 隆胚。以小鼠胚胎干细胞为供体细胞所做的试验 低。Wilmut等fl】用绵羊乳腺上皮细胞得到克隆羊 也似乎证实了这一点，其核移胚的囊胚率最高达 (Dolly)的总效率仅为0．2％。Wakayama等翻用小鼠 88％tsl。来自同一发育阶段的牛胎儿生殖细胞的 卵丘细胞进行的核移植研究其总效率为2．3％； 核移植胚胎，雄性生殖细胞的核移植胚的囊胚发 Cibelli等f3】在牛体细胞核移植研究中其总效率为 育率高于雌性，但这个差异并不显著。采自不同个 1．2％；Wells等f4】用奶牛卵泡壁颗粒细胞作核供体 体的卵丘细胞其克隆胚胎的发育潜力有明显不同， 进行核移植的总效率是2．8％；Polejaeva等[51用来 其原因还不清楚。乳腺细胞支持重组胚的发育能力 自成年猪的颗粒细胞进行核移植，其效率也是 (囊胚率7．14％)显著低于成纤维细胞(16．19％)和颗 122％。Keefer等[61用山羊的卵丘颗粒细胞系作供 粒细胞(19．0l％)(p0．05)，卵裂率无显著差异(p 核，得到活的后代，其中核移植的效率在2％～ 0．05)t9J；以卵丘细胞为核供体细胞组成重构胚， 13％。迄今为止，体细胞核移植研究中获得最高 卵裂率达到56．7％，发育至桑椹胚达l1．7％、孵 效率的是Kato等 在牛卵丘细胞核移植研究中获 化囊胚率为6．7％，显著高于成纤维细胞组成的 得，其总效率为13．8％，但在他们后来的研究中 重构胚(p0．05)t·ol。而成勇等fll】也证实了重构胚的 核移植总效率也仅为4．0％。研究表明克隆效率 发育率与供核细胞的细胞类型有关，由颗粒细胞 低主要是由于克隆胚胎重构化的不完全，目前人 构建的重构胚的发育率(25．0％)高于成纤维细胞构 们对重构胚胎的发育机制知之甚少。需要从克隆 建的重构胚(12．9％)。 程序各环节入手，充分考虑各影响因素如供体细 一 般认为分化程度较低的细胞用作核供体时 的核移植效率要高于分化程度高的供体细胞。与 [收稿日期]2007—12～29 [项目基金]中科院“科技支黔”，国家科技部“热带，亚热带地区高产 配子相比，体细胞的分化程度高，其DNA甲基 奶牛胚胎移植技术集成和养殖试验示范”(05EFN253002fiS)，科技部国际合作 化水平高于雌雄配子，基因组甲