牛GPAM基因遗传多态性分析及基因沉默对脂代谢的.docVIP

　　牛GPAM基因遗传多态性分析及基因沉默对脂代谢的 第一篇文献综述 第 1 章 牛 GPAM 基因研究进展 GPAM 基因由 20 个外显子组成，GPAM 酶催化磷脂生物合成和甘油三酯（TAG）合成的第一步反应，这个反应包括 TAG 转化为辅酶 A 和磷脂以及酰基辅酶 A 的合成[95]。研究表明哺乳动物体内有多种蛋白质具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性，通过调节作用，在酶催化的脂质生物合成反应中发挥作用。GPAM基因通过体液和中心调节作用，对哺乳动物体内能量消耗，脂肪合成代谢，胴体重量进行调控[95]。甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAM)催化甘油脂的生物合成过程中的第一步反应[1]。它在调控中起着关键的作用，细胞内甘油三酯和磷脂水平受到由 GPAM酶含量的多少的调控[1-3]。甘油-3-磷酸酰基转移酶有两种异构体，在哺乳动物中以线粒体和胞浆的形式存在[4]。GPAM 以饱和脂肪酰基辅酶 A 为底物，而胞内酶使用饱和和不饱和脂肪酸为底物[5]。1994 年底，GPAM 基因已在大鼠（NM.017274）和小鼠（NM.008149）身上实现了成功的克隆[6]。人类 GPAM 基因序列是由 基因，并将其定位于（BTA）26q22 染色体[1]。线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶基因，又名 GPTA1，mtGPAT，KIAA1560。GPAM 是 GPAT基因家族的一员，GPAT 主要分为线粒体 GPAT 即 GPAM（Mitochondrial GPAT）和微粒 GPAT（Microsomal GPAT）[1，95]。R.Roy 等人对小鼠和牛点的 GPAM 基因进行了充分的研究，他们使用小鼠 GPAM 基因序列设计特异性引物从而部分放大的并获得了牛 GPAM 基因，然后使用原位杂交体技术把牛的 GPAM 基因定位（BTA）于 26q22 染色体[2，95]。GPAM 基因由 828 个氨基酸组成，包含 20 个外显子，在细胞内位于线粒体外膜的多通道膜蛋白，人类和小鼠的 GPAM 基因很早以前就被定位，分别位于 10 号染色体上（HSA10q24rarr;q26）和 MMU19 上,牛的 GPAM 基因被位于牛（BTA）的染色体 26q22[3，95]。研究表明哺乳动物体内的多种蛋白质具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性，通过体液和中心调节作用在酶催化的脂质生物合成反应中发挥重要作用。GPAM 基因通过体液和中心调节作用，对哺乳动物脂肪合成代谢，能量消耗，胴体重量进行调控[4，95]。 . 1.2 GPAM 基因表达时的生理变化 GPAM 基因在所有的组织中都表达，在肝脏和脂肪组织中表达量最高，其次是肌肉和肾脏[15]。这种表达模式不对应相对蛋白水平或酶活性，而是显示了较强的转录后调控[16]。研究表明，小鼠禁食一周后，补喂高碳水化合物食物，GPAM 基因的 mRNA 会增加 30 倍；但是注射胰岛素的对照组小鼠就不会出现mRNA 水平的折叠。由此可知胰岛素对该基因的表达具有抑制作用[8]。然而，一些研究表明，GPAM 基因对遗传微粒型标签的合成也很重要。例如，在分化的 3T3-L1 脂肪细胞中，GPAM 基因的遗传活性会增加 30 倍[8]。GPAM 和其他酰基转移酶的氨基酸序列比对后找到了四个同源性强氨基酸序列。这四个基序分别为：GPAT（GPAM），酰基-甘油-3 -磷酸酰基转移酶（AGPAT），磷酸二羟基丙酮磷酸转移酶（DHAPAT）和 LPEAT[8, 17, 18]。研究表明：基序 1 中的组氨酸去离子化后可以和甘油-3-磷酸基团上的酰基辅酶 A 结合形成硫酯键从而促进亲核作用[19]。基序中的天门冬氨酸残基与组氨酸结合增加了甘油-3-磷酸羟基基团的亲核性。基序 2 通过定点突变来核实氨基酸序列的准确性[12]。研究表明，经分析酰基转移酶的氨基酸突变与人类遗传性疾病之间的关系，酰基转移酶的氨基酸突变会导致脂肪代谢障碍、软骨病等遗传性疾病。大肠杆菌的动力学研究表明：基序 I 和 IV 催化功能有助于甘油-3-磷酸的形成[10,20, 21]。虽然（基序 I-IV）的活性位点是位于 N 末端结构域中，但通过内部修饰作用，该区域还是起着关键的结构或调节作用。 . 第 2 章 甘油三酯的研究进展 2.1 甘油三酯的意义 对甘油脂生物合成过程中所使用的酶的研究可以追溯到 20 世纪 50 年代，其中大量的工作是在尤金bull;肯尼迪（Eugene Kennedy）实验室进行的[26]。从那时起，科学家已经在关于酶催化脂质生物合成反应的因素和调节脂质生物合成的因素方面取得了重要进展。由于大部分的脂质生物合成酶存在膜蛋白，以及由于许多的底物和产物是疏水性的，所以早期的研究中在纯化酶的方法上遇到了很大困难[27]。在过去的几十年中，科学家们在