LC-MS知识介绍.docxVIP

1、如何看质谱图(1)确定分子离子，即确定分子量：氮规则：含偶数个氮原子的分子，其质量数是偶数，含奇数个氮原子的分子，其质量数是奇数。与高质量碎片离子有合理的质量差，凡质量差在3~8和10~13，21~25之间均不可能，则说明是碎片或杂质。(2)确定元素组成，即确定分子式或碎片化学式：高分辨质谱可以由分子量直接计算出化合物的元素组成从而推出分子式，低分辨质谱利用元素的同位素丰度。M-1，M-15，M-18，M-20，M-31......意味着失H，CH3，H2O，HF，OCH3......(3)峰强度与结构的关系，丰度大反映离子结构稳定：在元素周期表中自上而下，从右至左，杂原子外层未成键的电子越易被电离，容纳正电荷能力越强，含支链的地方易断。2、离子源EI(ElectronImpactIonization):电子轰击电离—硬电离。CI(ChemicalIonization):化学电离—核心是质子转移。FD(FieldDesorption):场解吸—目前基本被FAB取代。FAB(FastAtomBombardment):快原子轰击—或者铯离子(LSIMS,液体二次离子质谱)。ESI(ElectrosprayIonization):电喷雾电离是最软的电离方式，采用离子蒸发，通常小分子得到[M+H]+]+,[M+Na]+或[M-H]-单电荷离子；化合物无需具有挥发性，离子在溶液中已生成；样品流速0.2-1mL／min；适宜极性分子的分析，能分析小分子及大分子(如蛋白质分子多肽等)，生物大分子产生多电荷离子，通常只产生分子离子峰，因此可直接测定混合物，并可测定热不稳定的极性化合物；通过调节离子源电压控制离子的碎裂（源内CID）测定化合物结构。APCI(AtmosphericPressureChemicalIonization):大气压化学电离也是软电离技术，高压放电发生了质子转移而生成[M＋H]+或[M-H]-离子；化合物要具有挥发性且热稳定，离子在气态条件中生成；样品流速0.2-2mL／min；只产生单电荷峰，适合测定质量数小于2000Da的弱极性的小分子化合物；适应高流量的梯度洗脱/高低水溶液变化的流动相；通过调节离子源电压控制离子的碎裂。APPI(AtmosphericPressurePhotoSprayIonization):更适宜做非极性分子。其中ESI，APCI，APPI统称大气压电离(API)。MALDI(MatrixAssistedLaserDesorption):基体辅助激光解吸电离，通常用于飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和FT-MS，特别适合蛋白质，多肽等大分子。NanoSpray离子源：适合于做微量的生化样品，其流速范围可从5nL／min-1uL／min。一滴样品就可做数小时的分析，可在最小的样品消耗量下获得最大灵敏度（高达Fmole），并可直接与微孔HPLC联用。3、质量分析器：双聚焦扇形磁场-电场串联仪器(sector)、四极质谱仪(Q)、飞行时间质谱仪(TOF)、离子阱质谱仪（TRAP）、傅利叶变换-离子回旋共振质谱仪(FT-ICRMS)、三重四极（QqQ）、四极+TOF（Q-TOF）。离子源→第一分析器MS1→碰撞室→第二分析器MS2→接收器碰撞诱导解离(collision-induceddissociation，CID)质谱：选择一定质量的离子作为母体离子，进入碰撞室，室内充有靶子反应气体(碰撞气体：N2、He、Ar、Xe、CH4等)，发生离子----分子碰撞反应，从而产生‘子离子’，再经MS2的分析器及接受器得到子离子质谱，一般称做CID谱。4、正、负离子模式的选择：正离子模式：适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。负离子模式：适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较多的强伏电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。5、流动相的选择常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液，如甲酸铵、乙酸铵等，还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节pH值。LC／MS接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液，含钠和钾的成分必须＜1mmol/L。（盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器）含甲酸（或乙酸）＜2％。含三氟乙酸≤0.5％。含三乙胺＜l％。含醋酸铵＜10一5mmol/L。送样前一定要摸好LC条件，能够基本分离，缓冲体系符合MS要求。6、流量和色谱柱的选择不加热ESI的最佳流速是1-50uL／min，应用4.6mm内径LC柱时要求柱后分流，目前大多采用1-2.1mm内径的微柱，TIS源最高允许1mL／min，建议使用200-400uL／min，APCI的最佳流速