七、管柱层析.PDF

七、管柱層析 35 七、管柱層析 一、原理： 層析是利用化合物在靜相與流動相之間的分佈差異以分離混合物的方法。其 中靜相可以是固體或者是吸附在惰性擔體（support ）表面的液體，而動相 可以為液體或者氣體，是一種高效率分離混合物的方法。管柱層析是在直立 的玻璃管柱中，裝填已經用沖提劑潤濕的吸附性固態填充物，例如矽膠或礬 土，作為靜相，要分離的混合物由管柱頂端載入，再以液態沖提劑（eluent ） 作為流動相，利用化合物與靜相之間的吸附力及化合物與沖提劑間溶解度的 差異，造成各成分物被沖提的速率不同，而達到區帶分離的目的。影響管柱 層析分離效率的因素包含： （一）靜相的材料：現今最常使用的靜相材料是矽膠以及礬土。矽膠和礬土 都是極性高的材料，與極性化合物的吸附力較強。因此沖提時，高極 性的化合物在管柱上的滯留時間較長，低極性的化合物在管柱上的滯 留時間較短。填充靜相的用量一般視分離的難易程度而定，原則上約 為待分離試樣重量的25 至30 倍。 （二）管柱徑長比：管柱長度與內徑的比例約為4 ：1 至8 ：1 較為合適。 （三）管柱的填充：管柱填充的好壞會直接影響分離的效果。若填充物上端 表面不平整、管柱中有氣泡或裂痕，會破壞分離區帶的平整，使分離 效果變差。填充物充填越緊密，分離效果越好。 （四）流動相的極性：當使用矽膠或礬土這種高極性的填充物時，沖提劑極 性越高，化合物在管柱上的滯留時間越短；反之沖提劑的極性越低， 化合物在管柱上的滯留時間越長，適當調整沖提劑的極性可以讓混合 物以適當速度流出。 （五）沖提速率：沖提的速率太快時，靜相填充物與試樣之吸附作用未達平 衡，區別力變小，造成分離效果變差。然而沖提速率放慢，雖較易達 到平衡，但擴散的問題加劇，造成分離區帶變寬，區帶重疊機會增高， 這會造成分離所需時間加長而且分離效果變差。一般沖提速度以每分 36 有機化學基礎實驗技能 鐘沖提液降低2.5 公分的高度為佳，也可以在沖提液面施加壓力以提 高流速。 （六）試樣的載入：未經稀釋的試樣絕不可直接載於靜相上，否則會超出填 充物頂端的負荷，造成分離區帶變寬。通常使用沖提劑將試樣配製為 5%~10%的溶液，然後載於靜相上。試樣溶液載入靜相時，必須等待 溶液完全進入靜相，才可加入沖提劑開始沖提。試樣載入時的技術好 壞會影響填充物上端的平整，為了保護靜相的上端，通常會加上一層 乾淨的海砂或無水硫酸鈉作為緩衝。 （七）流出液的收集：流出液分成小部分（fraction ）收集於試管中，每一 部分的量如果太多則分離區帶重疊機率增高，但若每次收集量太少， 會得到太多含有收集液的試管需要分析，影響效率。可概略以每次收 集管柱體積的一半為準，視分離的難易再做調整，越困難的分離，區 帶重疊機率越高，因此每次要收少一些。收集到的各部分以薄層層析 或其它方法分析，然後決定收集那些部分。 二、器材： 實驗器材包括：鐵架、鐵夾、玻璃管柱、燒杯、錐形瓶、玻璃棒、拍振棒、 滴管、試管、試管架、矽膠、沖提劑、試樣溶液、無水硫酸鈉或海砂。 三、實驗操作： （一）準備靜相 填充管柱的方法有濕式填充法（slurry method ）及乾式填充法（dry method ）兩種。濕式填充法是以燒杯稱取適量的矽膠作為靜相填充物。 取適量的沖提劑於另一燒杯中，將靜相填充物慢慢攪拌加入於溶劑中， 混合攪拌至成一稀泥狀且沒有氣泡存在為止。 （二）填充管柱 1. 架設玻璃管柱 玻璃管柱以廣用夾垂直夾放於鐵架上，管柱