耐热木聚糖酶水解法制备木寡糖的研究.pdfVIP

《饲料工业》·2008年第29酋第12期 试 耐热禾聚糖酶水解法制备禾寡糖的研究 朱孝霖 李 环 韦 萍 摘 要 为探讨耐热木聚糖酶水解自制甘蔗渣木聚糖制备木寡糖的工艺条件和分析水解液的寡 糖成分，试验以产耐热木聚糖酶的基因工程菌1020为原料，水解自制的甘蔗渣木聚糖，分别研究水解 过程中酶的用量、木聚糖的浓度及酶解温度对酶解反应的影响，并采用高压液相色谱和质谱联用技术 对水解液成分进行分析。试验结果表明，2％的木聚糖浓度，水解温度95℃，酶液用量100 U／g，酶解3 h 后DP值可降至2．94，满足生产木寡糖对聚合度的要求；并且水解液的成分主要为木糖、木二糖和木三 糖，没能检测到木四糖。耐热木聚糖酶在高温下酶解木聚糖对酶法制备木寡糖具有重要的应用价值。 关键词 木寡糖；耐热木聚糖酶；甘蔗渣；酶水解法 中图分类号 Q55 Research on the preparation of xylooligosacchrides with thermostable xylanase hydrolysis Zhu Xiaolin。Li Huan．Wei Ping Abstract The purpose was to discuss the preparation conditions of xyl00lig0sacchrides from bagasse with thermostable xylanase hydrolysis．With the thermostable xylanse from recombinant bacterium 1 020， the amount of xylanase，the concentration of substrate xylan and the hydrolysis temperature were studied．Also the composition of hydrolysis production was analyzed by HPLC and ESI—MS．The conditions of enzyme hydrolysis were 2％ xylan．1 00 U／g xylanase amount，and reaction time 3 h．And the productions were mainly xylose，xylobise，and xylotriose．The thermostable xylanase was of great value in the preparation of functional xyl00lig0saccharide． Key words xyl00lig0saccharide；thermostable xylanase；bagasse；enzyme hydrolysis 酶水解法是目前T业化生产木寡糖的主要方法。 1 材料和方法 利用木聚糖酶水解甘蔗渣是合理利用这一资源的重 1．1 试验菌株 要途径之一。木聚糖酶(B—D一1，4一xylanohydrolase，EC 基因工程菌 1020．目的基因为海栖热孢菌(Ther． 3．2．1．8)是木聚糖水解酶系中关键的水解酶之一．耐热 motoga maritima)XynB，表达载体为pET 28a(+)，宿主 的木聚糖酶冈其高温下的高催化活力以及较好的热 菌为大肠杆菌BL21(DE3)，具有卡那霉素抗性，由南 稳定性，使其存饲料、造纸、制备功能性寡糖等领域的 京_[业大学制药与生命科学学院菌种保藏室冻存。 应用越来越广泛。甘蔗渣则是甘蔗制糖工业的重要副 1．2 试验方法 产品，数量很大，是十分重要的资源．其主要成分是纤 1．2．1 木聚糖酶粗酶液的制备I1J 维素和半纤维素，经过加工可以制造木寡糖、木糖、木 将发酵液离心一洗涤一再离心收集细胞，以缓冲液 糖醇、木质素等产品 稀释合理倍数后的菌悬液作为试验的粗酶液。 本文采用基因：I