小反刍兽疫病毒荦基因重组杆状病毒的构建及间接犈犔 - 畜牧兽医学报.pdf

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１０４１９ １１４７１１５３ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 小反刍兽疫病毒 基因重组杆状病毒的构建及 犖 间接犈犔犐犛犃抗体检测方法的建立 １ １ ２ １ １ ３ 李 伟 ，李 刚 ，吴晓东 ，邱文英 ，张 坤 ， ＨｅｒｍａｎｎＵｎｅｒ 　 　 　 ｇ （ 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 动物分子营养学国家重点实验室，北京 ； １． １００１９３ ２．中国动物卫生与流行病学中心外来病诊断中心，青岛 ２６６０３２； ／ 农业生物技术实验室， 奥地利） ３．ＦＡＯＩＡＥＡ Ｓｅｉｂｅｒｓｄｏｒｆ 摘 要：本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒（ ） 蛋白的诊断小反刍兽疫的间接 方法。 ＰＰＲＶ Ｎ ＥＬＩＳＡ 　 利用 杆状病毒 昆虫表达系统，构建含有 基因的重组供体质粒 ，转化 ＢａｃｔｏＢａｃ  ＰＰＲＶ犖 ｐＦａｓｔＢａｃＨＴＡＮ 犈．犮狅犾犻 ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞，得到重组穿梭质粒ｐＢａｃｍｉｄＰＰＲＶＶ，转染昆虫细胞Ｓｆ２１，获得含有ＰＰＲＶ犖基因的重组杆 状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后， 鉴定出 左右的表达蛋白， 检测该蛋白具有很 ＳＤＳＰＡＧＥ ６０ｋｕ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 好的反应原性。以重组 ＢａｃｍｉｄＰＰＲＶＮ蛋白作为包被抗原，建立间接 ＥＬＩＳＡ检测方法。临床检测来自西藏疫区 的 份山羊血清和来自青海省非疫区的 份山羊血清，与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心（ ３７ ９２ ＣＩＲＡＤ ＥＭＶＴ）提供的竞争 ＥＬＩＳＡ试剂盒相比较，特异性为 ９６．２％，敏感性为 １００％，二者的符合率达到 ９６．９％。结果表 明本研究建立的间接 ＥＬＩＳＡ方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。 关键词：小反刍兽疫病毒；杆状病毒；昆虫细胞；间接 ＥＬＩＳＡ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５９．５ Ａ ０３６６６９６４２０１００９１１４７０７ 　　　　 　　　　 犆狅狀狊狋狉狌犮狋犻狅狀狅犳犚犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋犅犪犮狌犾狅狏犻狉狌狊犆狅狀狋犪犻狀犻狀 犘犲狊狋犲犱犲狊犘犲狋犻狋犻狊 犵 犚狌犿犻狀犪狀狋狊犞犻狉狌狊犖犌犲狀犲犪狀犱犈狊狋犪犫犾犻狊犺犿犲狀狋狅犳犐狀犱犻狉犲犮狋犈犔犐犛犃犳狅狉 犇犲狋犲犮狋犻狀 狋犺犲犛