牛呼吸道合胞体病毒g蛋白的截短表达与鉴定.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１２）：２４～２９ 牛呼吸道合胞体病毒Ｇ蛋白的截短表达与鉴定  冯军科　薛　飞 　李　娇　祖立闯　朱远茂　任宪刚 （中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室／大动物传染病研究室　哈尔滨　１５０００１） 摘要　将牛呼吸道合胞体病毒（ｂｏｖｉｎｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｃｙｔｉａｌｖｉｒｕｓ，ＢＲＳＶ）Ｇ基因截短成２个片段Ｇ１ 和Ｇ２，然后以人工合成的牛呼吸道合胞体病毒Ｇ基因为模板，利用ＰＣＲ分别扩增Ｇ１和Ｇ２基因 片段，其大小分别为５７０ｂｐ和３０８ｂｐ。将目的片段定向克隆到ｐＥＴ３０ａ表达载体，酶切及测序鉴 定均正确后，转化ＢＬ２１表达菌，经ＩＰＴＧ诱导后Ｇ１和Ｇ２基因片段均获得了表达，且为可溶性表 达。利用Ｎｉ柱亲和层析法在非变性条件下纯化重组蛋白，经免疫印迹试验鉴定证明纯化的重组 蛋白Ｇ１具有良好的抗原性和特异性，而重组蛋白Ｇ２无反应性。应用纯化的重组蛋白Ｇ１进行的 间接ＥＬＩＳＡ与免疫印迹试验在国内牛血清中检测到了ＢＲＳＶ血清抗体。对建立ＢＲＳＶＧ蛋白的血 清学诊断方法和为开展ＢＲＳＶＧ蛋白生物学功能的研究奠定了基础。 关键词　牛呼吸道合胞体病毒　Ｇ基因　克隆　表达 中图分类号　Ｑ８１９ 　　牛呼吸道合胞体病毒（ｂｏｖｉｎｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｃｙｔｉａｌ 易感。ＢＲＳＶ引起的急性呼吸道疾病通常发生在６月 ｖｉｒｕｓ，ＢＲＳＶ）为 单 分 子 负 链 ＲＮＡ 病 毒 目 龄以内的牛，成年牛也时有发生。 （Ｍｏｎｏｎｅｇａｖｉｒａｌｅｓ）副黏病毒科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）肺病毒 　　ＢＲＳＶ含有一个单股负链ＲＮＡ，病毒基因组全长为 亚科（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｉｎａｅ）肺病毒属（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ）的成员。 １５１４０ｎｔ，Ｇ＋Ｃ含量为３３％，编码区占８９％。ＢＲＳＶ不 牛呼吸道合胞体病毒感染多发于秋冬季节，主要感染 同毒株间未见到抗原变异，中和试验呈现完全的相互 牛、绵羊、山羊，也可感染猪和马。病牛和带毒牛是本 交叉反应。ＢＲＳＶ无血凝素和神经氨酸酶，含有 １１种 蛋白，其糖蛋白Ｇ（ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＧ）属于 型糖蛋白，含 病的传染源，绵羊和山羊也可成为传染源。从绵羊分 Ⅱ 有２５７个氨基酸，包括Ｎ端的胞浆区、疏水的锚定区和 离出来的病毒可使犊牛致病。该病常通过接触传播， ? 也可通过气雾或者呼吸道分泌物传播，并呈世界性分 胞外功能区。Ｇ蛋白是病毒主要的吸附蛋白，抗 Ｇ蛋 ［５］ 布，瑞士、英格兰、比利时、加拿大、美国、日本等已有病 白的特异性抗体可以阻止病毒与细胞的结合 ，同时 ［６，７］ 毒报道，而在北爱尔兰和新西兰已检测到 ＢＲＳＶ抗 Ｇ蛋白也是ＢＲＳＶ的主要保护性抗原之一 。Ｇ蛋白 ［１］ ［２］ ［８，９］ 体 。在墨西哥，牛血清的阳性率高达９０．８％ 。在 有两种形式，膜Ｇ蛋白和分泌型Ｇ蛋白 ，分泌型Ｇ ［１，３］ ［１０］ 山羊、猪和马也报道了存在ＢＲＳＶ血清抗体 。ＢＲＳＶ 蛋白是从ＯＲＦ的第二个ＡＵＧ起始翻译所得 。病毒