金鱼PP2A-B〃家庭调节亚基β基因在胚胎发育中的功能探究.pdfVIP

分类号 鱼至鱼 密级 学校代码 4020070 】Q婴 学号20081 金鱼PP2A—B’’家族调节亚基p基因在胚 胎发育中的功能研究 TheFunctionResearchof Subunit Regulatory 13lGeneofPP2A．B¨Fin amilyEmbryonic． ofGoldfish Developmental ／1 ● L，唧aSSlUSc11lrQll盖R 指导教师姓名、职称 奎互猩塾撞 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一一年五月 ㈨IIII I IIII II Ill II IIIII Y1 911904 摘 要 在细胞的生命活动中，蛋白质的磷酸化与去磷酸化有着非常重要的 2A，PP2A)作为蛋白磷酸酶 意义。蛋白磷酸酶2A(proteinphosphatase 家族中十分重要的一员，它与绝大部分真核细胞的各种调控都有非常密 切的关系．PP2A作为主要的丝／苏氨酸蛋白磷酸酶之一，其调节亚基对 PP2A行使功能具有巨大的作用。 长序列。结果显示，从金鱼中克隆得到的p基因包括一个含1746个核苷 酸的开放阅读框和编码一个67KD的蛋白。 试验中我们利用反义核酸技术研究PR72／B／P的功能。反义核酸 就是指能够与特定的mRNA准确互补、特异性的阻断其翻译的RNA 或DNA分子。通过使用反义核酸特异性的使某些基因的表达被降低 或停止，此过程即为反义核酸技术。其包括三种技术，分别是：反义 的功能时，反义核酶对降低一些有害基因的表达和失去控制的基因的 过度表达起着非常重要的作用。与传统的基因干扰手段相比，反义核 酸具有更多的优点。①高度特异性：反义核酸作用于靶RNA或DNA 的原理相似于“生物导弹”，通过特异的碱基互补配对作用。②高生 物活性和丰富的信息量：作为一种含有特定遗传信息的信息体，反义 核酸的碱基排列有着无穷的变化。③高效性：有效并且直接阻止疾 病基因的转录和翻译过程。④低毒、安全：目前的研究并没有发现 反义核酸的明显毒性，虽然其在体内的停留时间有长有短，但最终都 会被降解。反义核酸抑制基因表达时具有广谱性，不仅可以用来抑制 酶和受体蛋白，还可以用来传统方法难以起效的接头蛋白(adaptor)、 结构蛋白、转录因子等。 在了解PR72／B”／13在金鱼胚胎发育中的具体功能中，我们利用已经 克隆到的金鱼PR72／B”／13 反义表达载体，通过显微注射的方法将载体注射到金鱼的受精卵中，以 观察其对胚胎发育的影响。结果显示，当下调PR72／B’’／13基因的表达时， 在金鱼的胚胎时期我们发现了明显的组织和器官的畸形表型。在出膜期 大约有81％的绿色荧光胚胎出现畸形，在显微镜下观察我们可以发现主 要表现在脊椎和尾巴的发育不全或缺失。这些结果表明，PP2A调节亚基 对组织和器官的生成有着非常重要的作用，PR72／B”／13基因对于金鱼胚胎 发育是不可缺少的。在下序的工作中我们对畸形的胚胎进行了石蜡切片。 从切片的结果可以看出，有超过79％的畸形胚胎的眼睛有明显的畸