动物组织培养-1.pptVIP

1、悬滴培养法 6.培养板培养法 具体做法是将培养细胞接种在培养板的孔内，然后在CO2培养箱内培养。最常用的培养板有6孔、24孔和96孔培养板，后者最为常用。一般都是一次性使用。  3.3 动物组织培养的技术应用 本章小结 3.1动物组织培养的基本概念 3.11培养细胞的特性 3.12 培养液的组成成分 3.2动物组织培养的技术 3.21采用的一些培养方法 3.22单细胞分离培养 3.23培养细胞的生物学测定 3.24培养细胞的污染检测和排除 培养肿瘤细胞的生物学测定 1）组织起源 2）形态学观察 3）细胞生长特征 4）软琼脂培养 5）细胞核型分析 6）动物致癌试验 7）组织化学检查 8）凝集试验等 人癌细胞的个别特性 1）一些内分泌腺的肿瘤能产生激素。 2）有的非内分泌脏器的肿瘤会产生激素。 3）癌胚性蛋白质 药物疗效的评价 体外抑瘤试验： 多数药物的半数抑制浓度IC5010ug/ml,最高抑制效应为80％以上。 体内抑瘤试验： 瘤重抑制率＝（1－试验组瘤重/对照组瘤重）×100％。中草药抑制率大于30％，合成药大于40％ 疗效为生命延长率=(试验组存活天数/对照组存活天数－1)×100％ 药物敏感性试验 美蓝法： 利用活细胞的脱氢酶提供氢离子，使甲烯蓝还原为甲烯白。如果死细胞则会反映药物的抑瘤作用。 染料排斥试验法： 一般用0.2％台盼蓝或0.1％的伊红染料进行试验。 四唑盐（MTT）比色法： 四唑盐是一种能接受氢原子的染料，化学名3－（4，5－二甲基噻唑－2）－2，5－二苯基四氮唑溴盐。 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。 细胞存活率＝试验组光吸收值/对照组光吸收值×100％ 放射性同位素掺入法 常用H3－TdR或H3－UdR掺入处于DNA或RNA合成期的细胞，用液体闪烁计数仪可以了解药物对肿瘤细胞DNA或RNA合成之抑制效应。 用H3－亮氨酸掺入细胞蛋白质试验法，可以检测抗癌药物对细胞蛋白质合成的影响速度。 裸鼠移植瘤试验 裸鼠的特点：1）先天性胸腺缺损；2）胸腺依赖性免疫功能缺乏，T细胞功能接近于0，但B细胞功能大致正常；3）异种移植时无排斥反应。因此，它是一个理想的体内试验模型。 给裸鼠接种人体肿瘤组织或肿瘤细胞后，待肿瘤生长到可触及时，就可以进行药物试验治疗。疗效评定以治疗结束时给药组瘤体积小于对照组50％或存活天数超过对照组的50％，才认为有效。 3.4动物组织培养的进展 3.41无血清培养技术 3.42大规模细胞培养技术 3.43特种细胞组织培养 3.44种质资源的长期保存 3.41 无血清培养液 ①血清具有很多功能，但具有一定的干扰性 ②根据不同细胞系和细胞株，无血清培养液需要添加不同成分，如：激素，生长因子，结合蛋白质类，贴壁和铺展因子，低分子量营养因子等 ③基础培养液多用DMEM、F12、CMRL1066、RPMI1640、5A等 常用促细胞生长因子与激素 生长因子 EGF：表皮生长因子，单链多肽，53个氨基酸，分子量6045，是三胚层细胞的有丝分裂剂，促繁殖，改善表皮角质细胞的培养 FGF：成纤维细胞生长因子，分子量15000，使中胚层细胞的G1期缩短，加快分裂；有丝分裂促进剂，稳定培养细胞的表型表达，延缓细胞衰老 IGF：类胰岛素生长因子，功用促进运输，利于大分子合成，促肝细胞分裂，促鸡胚细胞分化 PDGF：血小板生长因子，功用①促使G0期细胞进入细胞间期②控制生长③对创伤愈合起作用 1）培养液中成分的活性要保持 2）在无蛋白培养液中培养的细胞，对环境很敏感，所以传代频率要高。 3）接种密度不要太低（104细胞/ml） 4）经常检测培养条件的质量 5）使用高度纯净的试剂 6）先要配制母液 无血清培养的操作中注意问题 3.4动物组织培养的进展 3.41无血清培养技术 3.42大规模细胞培养技术 3.43特种细胞组织培养 3.44种质资源的长期保存 3.42大规模细胞培养技术 利用大规模培养哺乳类细胞是一项重要的生产生物制品的技术，包括疫苗、干扰素、激素、生长因子和单抗等，具有很高的经济和社会效益，常用的方法有气升式深层培养系统、微载体培养系统、微囊培养系统、大载体培养系统和中空纤维培养系统。 气升式深层培养系统 全自动气升式深层培养系统为全部密闭结构。混合气体自培养器底部管道输入，气体沿着培养器中央的内管上升，一部分气体，从培养器的顶部溢出，另一部分气体被引导沿培养器的内缘下降，直达培养器底部和新吹人的气