吸附层析法.pptVIP

色层分析法 化学分离分析 ——吸附色层法 ②组： * 色层分析法 第 * 页 一．吸附层析（adsorption chromatography） 1.原理 2.吸附剂的类型及其选择 3.流动相及其选择 吸附 指在固体或液体内部或表面的选择性传递。 被吸附的物质称为溶质，固体材料称为吸附剂。 图15.1 吸附层析 混合物随流动相通过由吸附剂组成的固定相时在固定相和流动相作用下发生吸附、脱附、再吸附、再脱附的反复过程。 1．原理 吸附层析是通过样品在固定相和流动相之间的吸附、脱附作用而实现分离的，这种吸附作用是一种物理吸附，通常是单分子层或双分子层或多分子层。 包括几种作用力，被分离样品与吸附剂之间相反电荷基团与基团之间的静电引力，氢键、偶极分子之间定向力及范德华力等。 吸附等温线：在一定温度下，某种组分在吸附剂表面达平衡状态时在两相中浓度的相对关系曲线。 吸附等温线的斜率KD表示分配系数，Cs表示溶质在固定相中的浓度，Cm表示溶质在流动相中的浓度达到平衡时在固定相中的浓度 线形的吸附等温线 非线形的吸附等温线 2．吸附剂的选择 高选择性以实现很好分离； 高容量以减少吸附剂的使用量； 对于快速吸剂具有很好的动力学和传递特性； 具有化学和热稳定性，在流动相中不溶解以保持吸附剂特性； 具有一定的机械强度和惰性，防止破碎和腐蚀； 易于充填或铺层； 不会与欲分离试样和流动剂发生化学反应； 抗污染性强； 价格便宜。 吸附剂的多孔结构，粒度和粒子形状是影响色层系统特性的基本因素。 吸附剂一般可分为极性和非极性两类。 极性吸附剂包括氧化物、氢氧化物和盐，在吸附过程中，离子与偶极、偶极与偶极的相互作用起主导作用。 非极性吸附剂如活性碳，硅胶等，吸附作用主要是色散力作用的结果。 影响吸附剂性质因素：化学结构、吸附剂的溶剂化作用以及吸附剂的预处理、吸附剂的物理状态 在选择吸附剂时，一般是根据吸附剂和被吸附物质理化性质进行的。极性强的吸附剂易吸附极性强的物质、非极性的吸附剂易吸附非极性的物质。但是为了便于解吸附，分离弱极性的组分选用极性强的吸附剂，分离极性较强的组分应选用极性小的吸附剂。 常用的吸附剂有Al2O3，硅胶， 羟基磷灰石，聚酰胺等。 （1）硅胶 硅胶是由聚硅酸脱水制得的颗粒状吸附剂 （2）氧化铝 Al2O3是由Al(OH)３脱水制得，Al2O3表面存在铝羟基Al－ＯＨ，由于羟基的Ｈ键作用而能吸附其它物质。 Ａl2O3可分为中性、酸性、碱性三种。 中性氧化铝适用于醛、酮、酯、内酯化合物及某些苷的分离； 酸性氧化铝适用于酸性化合物，如酸性色素、某些氨基酸， 以及对酸稳定的中性物质的分离； 碱 性Ａl2O3适用于分离碱性化合物如生物碱、醇以及其它中性和碱性物质。 一般讲，能用酸性或碱性氧化铝分离的物质也可 用中性的氧化铝分离。 一般Ａl2O3用量为样品量的5～２０倍。 活度级别 含水量（%） Al2O3 硅胶 Ⅰ ０ ０ Ⅱ ３ ５ Ⅲ ６ １５ Ⅳ １０ ２５ Ⅴ １５ ３８ （3）羟基磷灰石 化学式[Ca5(PO4)3OH]2，简称HA。HA有三种规格，分别适用于不同条件。由于HA的吸附容量高，稳定性好（在T85℃，PH5.5~10.0均可使用）。 HA的Ca2＋基团和生物表面的负电荷基团的相互反应，在用HA分离生物分子过程中起着重要的作用。HA的PO43-基团与生物分子表面的阳电荷基团的相互反应，起着次要的作用。 在使用HA作为固定相基质时，有几点应注意： i) HA系干粉末时，要先在蒸馏水中浸泡，使其膨胀度（水化后所占有的体积）达到2～3mL/g后，再按1:6体积加入缓冲液（如0.01mol/L NaP(磷酸钠缓冲溶液)，PH6.8）悬浮，以除去细小颗粒。 ii) HA悬浮液须用漩涡振荡器混合，若用磁棒或玻璃棒搅拌时，HA的晶体结构会受破坏。 iii)忌用柠檬酸缓冲液和PH5.5的缓冲液。当用过的HA层析柱再生时，要先挖去顶部的一层HA，然后用一倍床体积1mol/LNaCl溶液洗涤，接着用4倍床体积的平衡液洗涤平衡，如此处理后即可使用。 iv)就操作容量来说，一般细颗粒HA比粗的大；从分辨率比较，粗颗粒HA也没有细的好。但是用细的颗粒层析时，柱子直径大些才能达到满意的流速。 （4）聚酰胺 由己内酰胺聚合而成，层析用聚酰胺是白色多孔性的非晶形粉末，对碱比较稳定，对酸的稳定性较差。 聚酰胺分子内存在着很多的酰胺键，可与酚类、酸类、醌类、硝基化合物等