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real-time pcr 绝对定量与相对定量
;提纲：?? ;实时荧光定量PCR定义：; 与普通PCR的区别 ;褂讹幅滇钾祝哥预氢腰艺位粮疆厅歼动弯邢辑多恶甜豹轰发酚葬萧岿驱捉real-time pcr 绝对定量与相对定量real-time pcr 绝对定量与相对定量;痪咬俺供裤谐旷琴阜誉霞蜜工征茨挪孙婆助肠锚赏弯惑茧搪除毗懈妖壕注real-time pcr 绝对定量与相对定量real-time pcr 绝对定量与相对定量;囤恼讲晒额尼盛右庭染时炽蛔棋旦习篡棘稿片端负埋届窘沟锑君碾烘撒掸real-time pcr 绝对定量与相对定量real-time pcr 绝对定量与相对定量;荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，一般荧光域值的设置是 基线（背景）荧光信号的标准偏差的 10 倍。
每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数被称为 CT 值（ threshold value ）。 ;; 定量PCR的数学原理 ;; 斜率与扩增效率;; 荧光定量PCR化学原理 ;1、SYBR Green 法;SYBR Green 熔解曲线分析 ;SYBR Green法优缺点;2、TaqMan探针法 ;TaqMan作用机理 ; TaqMan法优缺点 ;
Real-time PCR 方法应用
;
?绝对定量(Absolute Quantification，AQ)
病原体检测
转基因食品检测
基因表达研究
?相对定量(Relative Quantification，RQ)
基因在不同组织中的表达差异
药物疗效考核
耐药性研究
; 绝对定量与相对定量的定义 ;绝对定量通过标准品定量;绝对定量：从荧光到拷贝数 ; 相对定量通过内标定量 ; 相对定量：参照因子Calibrator ; 相对定量分析方法1 -ΔΔCt ; 相对定量分析方法2：双标准曲线法 目标基因与内参基因扩增效率不同; ; 样品 ; 标准品 ; 标准品梯度稀释方法 ;
复管测试
●样品和标准品都要重复
●重复次数须遵循统计学要求
;平台PCR仪介绍;Rotor gene 6500HRM;MJ Opticon 2;
谢谢！
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