纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版）主要用途.PDFVIP

纯化线粒体溶解试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 纯化线粒体溶解试剂是一种旨在通过化学裂解处理，使线粒体膜结构破坏而获得线粒体内的活性 蛋白酶系统的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种 线粒体（动物、人体、植物、昆虫等）的内容物预制备。可以被用于细胞凋亡、信号传递、古生物、衰老、 代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。 技术背景 线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体中含有丰富 的细胞色素氧化酶系统、细胞凋亡相关蛋白和独立的核外DNA 。通过线粒体溶解，可以进行相关蛋白的独 立分析。 产品内容 溶解液（Reagent A ） 毫升 上样液（Reagent B ） 毫升 产品说明书 1 份 保存方式 保存在4℃冰箱里，有效保证6月 用户自备 线粒体粗提分离试剂盒（ 10006 ）：用于获得线粒体成组分 1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器 微型台式离心机：用于样品制备 涡旋震荡仪：用于混匀 实验步骤 1． 从－70℃冰箱里取出线粒体颗粒样品，置入冰槽里 2 ． （选择步骤）如果线粒体样品不是颗粒状态，而是液体状态且容积过大，放进 4℃微型台式离心机离 心 20 分钟，离心速度为 16000g （或13000RPM，例如EPPENDORF 5415 ） 3 ． （选择步骤）小心抽去上清液 4 ． 加入 xx 微升溶解液（Reagent A ）到线粒体颗粒样品中 5 ． 涡旋震荡 15 秒 6 ． 置入冰槽中孵育 15 分钟 7 ． 涡旋震荡 60 秒 1 8． 4℃微型台式离心机离心 2 分钟，离心速度为 16000g （或13000RPM，例如EPPENDORF 5415 ） 9 ． 小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管――此为所有可溶性线粒体蛋白系统 10．若暂时不予后续处理，保存在－20℃冰箱里或长期保存，放进-70℃冰箱里 11．继续进行下列操作： 操作一、可溶性线粒体蛋白电泳 1） 移取 xx 微升上清液到新的 1.5 毫升离心管， 2 ） 加入 xx 微升上样液（Reagent B ） 3 ） 涡旋震荡 15 秒 4 ） 放进微型台式离心机离心 10 秒，速度为 2000RPM 5 ） 煮沸 5 分钟 6 ） 上样，进行电泳操作和西方杂交 操作二、线粒体总蛋白定量检测 1） 移取 10 微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－ 30030.1 ） 注意事项 1． 本产品为 20 次操作 2 ． 整个操作须在4℃条件下进行 3 ． 操作时须戴手套 4 ． 建议使用 108细胞或 200 毫克组织获得的线粒体量 5 ． 如果线粒体样品的液体容量少于 50 微升，可直接加入 100 微升溶解液（Reagent A ）进行 操作，无需再次离心 6 ． 如果需检测不溶性线粒体蛋白，可保留线粒体溶解后的沉淀物，直接加入 10 微升上样液 （Reagent B ）和 10 微升用户自备的无离子水，然后继续操作一的步骤 3 至 6 7 ． 本公司提供系列线粒体试剂产品 质量标准 1． 本产品经鉴定性能稳定 2 ． 本产品经鉴定无蛋白酶污染 3 ． 本产品经鉴定蛋白萃取产量和纯化程度高 2