实验12-透射比浊法测定C反应蛋白.pptVIP

* * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验12 透射比浊法测定C反应蛋白 北华大学医学检验学院　赵云冬 实验 12 透射比浊法测定C反应蛋白 实验目的 掌握：透射比浊法测定C反应蛋白（CRP）原理。 熟悉：透射比浊法测定CRP试剂成分。 实验原理 光线通过浑浊介质溶液时，一部分被混浊颗粒吸收，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。 免疫透射比浊法是利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。 使用抗CRP抗体和样品中的CRP进行抗原-抗体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映CRP浓度。 试剂与器材 1．试剂Ⅰ（R1） ①100 mmol/L Tris缓冲液（pH7.5）； ②聚乙二醇； ③0.95g/L叠氮钠。 2．试剂Ⅱ（R2） ①100 mmol/L Tris缓冲液（pH8.0）； ②羊抗人CRP抗血清； ③0.95g/L叠氮钠。 3．仪器 自动生化分析仪。 操作步骤 按表3-5操作 混合， 37℃5 min，在波长340nm，生理盐水调零， 读各管吸光度(A2B，A2U) 50 50 试剂Ⅱ 混合， 37℃5 min，在波长340nm，生理盐水调零， 读各管吸光度(A1B，A1U) 250 250 试剂Ⅰ － 15 生理盐水 15 － 血清标本 测定管（U） 空白管（B） 加入物(μl) 表3-5 免疫透射比浊法测定C反应蛋白操作步骤 计算 式中265/315是进行体积校正参数，265为加入试剂Ⅱ前体积，315为加入试剂Ⅱ后体积。 按照试剂配套标准品使用要求，用5个不同水平的标准液，并以生理盐水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型如Logit-Log，拟合成校准曲线。校准仪器后，仪器直接报告检测结果。 参考范围 新生儿：血清CRP≤0.6mg/L； 出生后l周至l个月婴儿：血清CRP≤1.6mg/L； 孕妇：血清CRP≤47mg/L； 成人和儿童：血清CRP（0.068~8.2）mg/L。 临床意义 CRP是机体对炎性刺激或组织损伤发生的急性时相反应时出现的一种急性时相蛋白。 1．各种细菌感染 急性化脓性炎症、肺炎、心内膜炎、尿路感染等，风湿热，传染性单核细胞性增多症等炎症性疾病，血清CRP升高。 2．组织损伤 心肌梗塞、外伤、烧伤等，恶性肿瘤，风湿性疾病，肉芽肿，何杰金氏病，肾移植排异反应等疾病。 临床意义 3．鉴别诊断 CRP测定在鉴别有明显的炎症或组织损伤的疾病与无炎症或炎症极轻的疾病、鉴别细菌性或病毒性炎症时很有价值。 4．评估病情及疗效 CRP升高标志病情发展，由升高变为下降，标志病情趋于稳定，是评价风湿热等疾病病情活动性的最佳参数之一，也是某些疾病治疗有无效果的参考指标。 5．用于器官移植排异反应的检测 排异反应时血清CRP水平持续升高。 注意事项 1．CRP参考值范围随测定方法、试剂不同而异，请参照不同试剂盒说明书。 2．不同的厂家，不同批号的试剂不能混用。 评价 1．测定CRP的方法：①灵敏度较低的免疫扩散法、火箭电泳法、胶乳凝集试验；②高灵敏度、高精密度的放射免疫、酶免疫、免疫比浊等定量试验；③其他方法如ELISA、免疫发光法和化学发光法，虽然灵敏度和精确度都较高，但其成本也较高。 免疫比浊法具有试剂稳定、操作简便、流程短、重复性和精确性好的优势，适合CRP定量测定。 评价 2．前带限制 CRP浓度≤2 000mg/L时无前带现象。抗原与抗体反应时如果抗原抗体比例适当可形成大的抗原抗体复合物，反应体系出现浑浊；当待测物质（抗原）含量过高时，抗原与抗体的比例不适合，所形成的结合物少且小，反应体系不出现浑浊称为前带现象。 3．特异性/干扰 当样品中Vc浓度≤1 704?mol/L、胆红素浓度≤684?mol/L、血红蛋白浓度≤5g/L、甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时无干扰。 评价 4．灵敏度/检测限 本试剂的检测限为2mg/L。 5．超敏C反应蛋白（Hs-CRP） 是根据测定方法更敏感而命名。临床测定CRP的方法检测线性一般为2 mg/L ~250mg/L，缺乏较高的灵敏性。胶乳增强的免疫比浊法等技术大大提高了分析的灵敏度（检测低限为0.005 mg