大孔树脂色谱法.docVIP

大孔树脂使用方法 发布者： HYPERLINK /iask/user/701501844fd8d6aa.html \t _blank 郭玉亮　　发布时间：2011-1-4 12:05:24 ? 一大孔吸附树脂的预处理： ? 大孔树脂在试验中使用时间较长，必须保证不受霉菌污染。新购树脂一般用氯化钠及硫酸钠处理过，但树脂内部存在未聚合的单体残存的致孔剂、引发剂、分散剂等用前必须除掉。 预处理的流程简述如下： （1）?????? 以0.5BV的乙醇浸泡树脂24h （1BV为1个树脂床体积） （2）?????? 用2BV 的乙醇以2BV/h流速通过树脂柱，并浸泡4-5 h （3）?????? 再用水以同样流速洗净 （4）?????? 用乙醇洗至流出液加水不呈白色混浊为止。 （5）?????? 用2BV的5%HCL 溶液以4-6 BV/h 的流速通过树脂层。并浸泡树脂2-4h 。而后用水以同样流速洗至出水pH 中性 （6）?????? 用2BV 的2%NaOH 溶液 以4-6 BV/h? 的流速通过树脂层 并浸泡树脂2-4h 而后用水以同样流速洗至出水pH 中性。???? 也可采用下列程序：在洁净的分离柱内，放入已去除外来杂质，体积恒定的大孔吸附树脂加入相当于树脂体积0.4-0.5倍的乙醇（或甲醇）浸泡24 h ，然后用树脂体积的2-3倍的乙醇（或甲醇）与水交替反复洗脱交替洗脱2-3次，至最终以水洗脱后，保持分离使用前的状态。醇洗脱液加水不显混浊。也可用电导率、荧光和紫外吸收等作为前处理的标准。 二大孔树脂的使用 大孔树脂是大孔径的高分子分离材料，中草药有效成分在大孔树脂上的吸附 是大孔树脂与有效成分形成以范德华力和氢键为主的一分子间作用力的结果。大孔树脂依据其聚合物的单体组成不同，可以分成非极性和极性两大类。非极性吸附树脂适合从极性溶液中（如水溶液）中吸附非极性物质。中等极性树脂可从极性溶液中吸附非极性物质，还能从非极性溶液中吸附极性物质。 大孔树脂的孔径和比表面积是影响大孔树脂对物质的吸附的主要因素。大孔树脂比表面积越大，单位质量大孔树脂吸附的作用面积越大，单位质量大孔树脂吸附有效成分就越大。而大孔树脂的比表面积还包括内孔网的面积。树脂孔径过小有效成分分子不能进入树脂内部，只能在树脂外表面吸附，相应的比表面积就比较小。因此选择的时候应该根据目标物的分子量选择合适孔径的树脂才能使吸附的有效面积增大。选择适用的树脂，采用合理的实验设计和方法工艺条件才能充分发挥大孔树脂的作用。用吸附曲线解析曲线具体地应该通过实验确定。 2.1树脂型号的确定?? 考察某种树脂是否适合于该产品。首先考察该树脂的吸附率和吸附量。即树脂对所纯化分离的有效成分要有较大的吸附量。然后，需考察树脂对所分离的有效成分有良好的分离性能? 目标成分能比较集中的被洗脱出来。采用的方法如下 吸附率和吸附量的测定： 吸附率 E% =C0 —Ce / C0 ×100% ?C0 —? 吸附前溶液的浓度mg/ml ??Ce —? 吸附后溶液浓度 E% ?—吸附率 吸附量 Q=（ C0 —Ce）×V/W? Q—吸附量mg/g? W 干树脂重? V溶液体积 ? A静态吸附? 以葛根素中黄酮提取为例? 将10g 处理好的各种树脂分别加入葛根素水溶液30ML 总黄酮浓度为9.4mg? /mL? 每5min 振摇1次，2h 小时后分别取各树脂的吸附溶液1ML进行吸光度的分析，计算各种树脂对葛根素总黄酮的吸附率。 B静态解析： ?将静态吸附的树脂过滤抽干，加30 ml? 70%乙醇解析每5分钟振一次 2h 后分别取各解析液测定黄酮的浓度。以计算各种树脂对黄酮的解析率。 C动态吸附 准确称取10ml 或20ml?? 树脂在干净的2 ×20cm色谱柱内，加入葛根素的水溶液总黄酮的浓度为9.4mg/ml? 于柱顶，以2BV/h 的流速进行动态吸附，收集流出液。按床体积收集进行分析，测出目标物的浓度黄酮含量，然后以洗脱液体积为横坐标，流出液中的目标物含量为纵坐标绘制动态吸附曲线，计算饱和动态吸附量。并计算达到吸附饱和时，所吸附的目标物的量。可以比较出何种树脂的吸附量大。 2.1吸附工艺的确定 A上样液 pH值的选择和盐的浓度的影响 改变溶液pH 值可以影响有效成分在大孔树脂上的吸附。溶液的pH值可以体现在下列几方面,改变有效成分在溶液中的的存在形式,例如生物碱在碱性溶液中以游离态形式存在，而在酸性溶液中以离子形式存在。再次，溶液pH值改变可以影响有效成分在溶液中的溶解度。溶液pH 值升高皂苷在溶液中的溶解度增大。溶液pH 值改变可以改变溶液的极性，影响有效成分和大孔树脂间的分子间作用力。如生物碱等碱性有效成分在溶液变成酸性后,会改变生物碱等碱性成分在溶液中的存在形式,降低其在大孔树脂上的吸附。