麻鸡疫病病原的分离与鉴定.pdfVIP

山东农业科学 2008，4：99～100，107 Shandong Agricultural Sciences 麻鸡疫病病原的分离与鉴定 骆延波 ，王雪竹 ，张祥礼 ，张再辉 ，张 华 ，姜瑞芹 (1．山东省健牧生物药业有限公司，山东 济南 250100；2．平度市畜牧局山东 平度266500； 3．滕州市畜牧兽医技术服务中心，山东 滕州 260200；4．海阳市畜牧局，山东海阳 265100) 摘 要：通过对致麻鸡发病的病毒毒株的分离，经电镜观察、血液凝集试验、病毒中和试验、动物回归试 验、鸡胚接种试验等结果表明，病毒粒子呈球形，表面有囊膜，直径100—450 am，能凝集鸡红细胞，血凝反应 能被新城疫标准阳性血清抑制，能致4周龄鸡发病死亡，MDT为38．2 h，ICPI为1．68，IVPI为2．33。病毒对氯 仿、胰酶及酸敏感，能被二价镁离子保护，在4~C放置30 min，其感染力无影响，但对热敏感。以上试验结果表 明，病毒为新城疫强毒株。 关键词：麻鸡；新城疫病毒；分离；鉴定 中图分类号：$855．3 文献标识号：A 文章编号：1001—4942(2008)04—0099—03 在山东临沂一个大型麻鸡养殖场暴发以甩 1．2．3 鸡胚接种 将上清液以0．1 ml／胚尿囊腔 头、呼吸困难、头颈扭曲、腺胃乳头出血、肠道多处 接种SPF鸡胚5枚，37℃孵育，每隔4 h照检一 溃疡及片状出血、排黄绿色粪便等为特征的传染 次，及时捡出死亡鸡胚。并将正常死亡鸡胚置于 病，发病率70％左右，死亡率约40％。根据临床 4℃冰箱中冷藏过夜。 症状及发病后的用药情况，初步判断该病为病毒 1．2．4 尿囊液收取 在无菌条件下将上述死亡 性疾病。鉴于目前关于麻鸡疾病报道较少，为查 鸡胚尿囊液(暂命名为LY)分别收取，盛于灭菌 明该病病原，给禽病防治提供依据，笔者对该病原 西林瓶中，并观察鸡胚发育及病变情况。 进行了分离与鉴定。 1．3 病毒鉴定 1．3．1 效价测定 按常规方法测定鸡胚尿囊液 1 材料与方法 的血凝效价(HA)，保留有血凝效价的尿囊液，并 1．1 材料 测定有血凝效价鸡胚尿囊液的鸡胚半数致死量 SPF鸡胚和雏鸡，购自山东省农业科学院家 (ELD5o)。 禽研究所SPF鸡场。新城疫标准血清购自中国 1．3．2 解脱及血凝热稳定性试验 参照文献 兽药监察所。病料为取自病死鸡体中相对无菌采 进行。将分离毒LY、标准毒F蛐E。、标准弱毒株 集的有出血点的腺胃、表现出神经症状的鸡脑。 Lasota按标准方法分别测定其鸡红细胞的凝集价 1％鸡红细胞悬液，自行配制。 (HA)，读数后振荡，使红细胞悬浮，4℃过夜，读 1．2 病毒分离 数后再悬浮，再于2 h后读HA值。洗脱速度分 参照文献…操作。 快速、中速、慢速。第1次悬浮过夜后不凝集者为 1．2．1 病料处理 将腺胃及无菌取得的鸡脑，剪 “快速解脱”，仍凝集者为“慢速解脱”，第2次悬 碎研磨，以1O倍生理盐水稀释，5 000 r／min离心 浮2 h后不凝集者为“中速解脱”。将上述毒株以 10 min，取上清液加双抗1万单位／ml，室温下放 1 500～2 000 r／min离心10 min，每株取上清0．5 置4 h，一10℃保存备用。