探讨聚肌胞联合E7免疫对宫颈癌患者树突状细胞的.docVIP

　　探讨聚肌胞联合E7免疫对宫颈癌患者树突状细胞的 1 引言 　　人乳头瘤病毒(HPV)感染是引起宫颈癌的主要病因，HPV 相关抗原具有宫颈癌特异性，因此HPV 相关抗原能够有效预防人的HPV 感染，但是临床研究发现不能治疗HPV 感染、宫颈癌或癌前病变。笔者首次报道，聚肌胞(poly (I:C))联合E7(44-62)（属HPV 多肽，同时含MHCI 和II 类抗原）能产生特异性细胞毒性T 细胞反应且增加树突状细胞（DC）数量，完全抑制人宫颈癌模型小鼠的肿瘤生长，与MHC I 类抗原比较，含MHC I 和II 类抗原的多肽疫苗能够显著延长抗肿瘤免疫反应时间[1-3]。拟通过MTT 实验和流式细胞技术研究正常人、宫颈癌和癌前病变患者的外周血DC 在聚肌胞联合E7(44-62)刺激下的免疫反应，为其临床应用提供理论和实验依据。 　　2 材料和方法 　　2.1 检测对象及分组 　　（1）宫颈癌组： 10 例。为湖南省肿瘤医院收治的宫颈癌患者，女，年龄41～62（平均51.5）岁。所有宫颈癌均经病检证实，凡接受放、化疗或免疫调节治疗患者均排除在外。术前1 周内清晨空腹抽取外周静脉血，肝素抗凝，待检。 　　（2）CIN 组： 10 例。均为宫颈上皮内瘤变Ⅱ/Ⅲ期患者，所有宫颈上皮内瘤变经病检证实。女，年龄39～54（平均46.2）岁。术前1 周内清晨空腹抽取外周静脉血，肝素抗凝，待检。 　　（3）正常对照组： 10 例。女，年龄28～35 岁（平均34.2）岁，均为在校的健康志愿学生，清晨空腹抽取外周静脉血，肝素抗凝，待检。 　　2.2 检查项目及方法 　　2.2.1 DC 的分离和培养 　　方法见参照文献[4]，以Ficoll 密度梯度离心方法从外周血中分离单个核细胞，在无菌条件下将所获细胞加入含10%小牛血清的RPMI 1640 培养液（美国GBICO 公司产品）中培养（37℃、5%CO 2）。1h 后，轻洗培养瓶去除非贴壁细胞，贴壁细胞加入含重组人白细胞介素-4(500U/mL)和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子（500U/mL）的RPMI 1640 培养液中继续培养7d，2～3d 更换培养液1 次。 CD11c+/CD86+的表达；G：宫颈癌组DC 在加入培养液后CD11c+/CD86+的表达；H：宫颈癌组DC 在加入聚肌胞后CD11c+/CD86+的表达；I：宫颈癌组DC 在加入聚肌胞联合E7(44-62)后CD11c+/CD86+的表达。宫颈癌组DC 的CD11c+/CD86+的表达水平显著低于C 组和CIN 组（Plt;0.01，Plt;0.05），C 组CD11c+/CD86+的表达水平显著高于CIN 组（Plt;0.05）。与聚肌胞组比较，聚肌胞联合E7(44-62)刺激能够显著提高宫颈癌患者外周血的DC 的CD11c+/CD86+表达水平(P 值分别lt;0.01，lt;0.05)。 　　4 讨论 　　E7 基因是引起宫颈上皮细胞恶变最重要的癌基因之一，所编码的E7 蛋白是宫颈癌特异性抗原。因此，E7 蛋白适于作为宫颈癌疫苗的抗原物质[5]，但单独免疫后往往无法产生有效的抗宫颈癌免疫应答，其较弱的免疫原性及主要组织相容性抗原（MHC）限制性（即必须与MHC 类分子结合后才能被具有相同MHC 表型的免疫细胞所识别）是抑瘤失败的主要原因[6,7]。 　　聚肌胞是一种人工合成的双链RNA，和于病毒感染的双链RNA 具有类似的抗病毒和抗肿瘤功能。聚肌胞是Toll 样受体3 的配体，Toll 样受体3 在人和动物髓样DC、T 细胞、纤维原细胞内同时表达，聚肌胞与Toll 样受体3 结合能够诱导大量的IFN-alpha;和IFN-beta;[8]，后者具有广谱抗病毒作用。聚肌胞增强CD8+ T 细胞的功能，而且通过抑制凋亡延长CD8+ T细胞的存活；还能够增加活化CD4+ T 细胞的存活率；源自黑色素瘤特异性抗原的MHCⅠ类多肽和聚肌胞联合免疫小鼠后，能够明显增加抗原特异性CD8+ T 细胞的数量和IFN-gamma;、TNF-a 的释放，并且还抑制黑色素瘤细胞的生长[9,10]。聚肌胞能够增强免疫反应性、促进具有MHCI、II 类表型T 细胞的存活/功能以及促进DC 成熟和增加抗原呈递能力的特性[11]。 　　笔者[1]研究含有全部抗原决定簇的肿瘤细胞裂解体联合poly(I:C)免疫的抑瘤作用，采用联合注射poly (I:C)和TC-1 细胞裂解体（TC-1 细胞是转染 E6、E7 基因和活化H-ras 基因的C57BL/6 小鼠肺上皮细胞）的方法，能够明显延缓人宫颈癌模型小鼠的肿瘤生长；另一种方案先将poly(I:C)转染TC-1 细胞，裂解已转染的TC-1 细胞后注射入人宫颈癌模型小鼠皮下，结果发现比联合注射poly (I