用光学传感器非侵入式、实时监控大肠杆菌发酵过 程中的氧气.PDFVIP

用光学传感器非侵入式、实时监控大肠杆菌发酵过 程中的氧气和pH 作者：Derek Guenther和Yvette Mattley，博士 传感材料和光电子学的进步使得新的光学传感器能应用于生命科学、制药、 应用说明 生物技术等领域。与传统的电化学传感技术（诸如原电池型传感器）相比， 海洋光学的光学传感器，外观小巧且可定制参数，可实现非侵入式测量，并 且不会消耗样品。 关键词 操作原理是在光纤的尖端，粘性薄膜（如传感片），或者平面基材（如微量 • 生物发酵 滴定板）上涂抹溶胶凝胶基质，该基体以装载有氧敏感荧光团或pH指示染剂 • 大肠杆菌 为特征。指示剂材料能够改变特定分析物的光学性质，然后通过电子器件测 • 氧气 定该响应。对于氧，NeoFox相位荧光计可测量溶解氧或气态氧的分压；对于 • pH pH值，则由微型光纤光谱仪测量pH染剂的比色度（吸收度）响应。 技术 • 氧传感器 • pH测定 • 荧光 • 比色法 应用 前言 • 生物过程监控 • 生物技术 为说明光学氧/pH 传感器在生物反应器内监控生物学参数的能力，我们将氧和 • 制药 pH 敏感性传感片放入小型生物系统中，以监控大肠杆菌发酵期间的条件。生物 反应器是封闭式环境系统，细胞在特定的条件下生长，以合成最终产物。为优 • 生命科学 化生物过程，需要持续监控这些系统中的 DO 和 pH。光学传感器被用于测量生 物反应器中液相的氧气和 pH。 监控大肠杆菌发酵过程 用于生产重组蛋白和其他产物的大肠杆菌发酵是一个复 杂、多步骤的过程，需要对培养条件进行严格监控。要令 生物反应器中的发酵过程达到最佳水平，氧气水平和 pH 应 维持在较窄范围内。细菌细胞在复制过程中消耗了氧气， 因此应将氧气鼓入培养物中。同样，细菌细胞在生长过程 中释放出代谢副产品，应定期将 pH 调节至最佳水平。 维 持最佳生长条件以实现高产量，需要在反应过程中实时监 控氧气和 pH。 测量氧气和 pH 的技术很多，包括原电池型传感器、顺磁性 传感器、燃料电池传感器甚至试纸。 但虽有这些技术都是 侵入式的，需要采集培养物样品或将探头或传感器置入反 应器中，这种做法可能产生污染或改变生长条件。 光学传感器是替代侵入式监控措施的非接触技术。 荧光可 图 2：在大肠杆菌发酵反应期间监控小型生物系统中的氧气 用于检测生物反应器液体和顶空相中的氧气。 用相位荧光 和 pH。 计来监控溶解或气态氧气的分压，以测量蓝色 LED 激发信 号和荧光发射信号之间的相移。 相对而言不受漂移的影响。 还可采用比色 pH 传感作为不 受溶液颜色、沉淀物或浊度影响的反射传感器。 反射 pH 和氧传感器一般包含具有主动式传感层的传感片， 将用于氧检测的靶向敏感性荧光团或用于 pH 检测的染料指 示剂载入溶胶凝胶基质内，就形成了主动式传感层。 在一